西湖大学施红军获国家专利权
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龙图腾网获悉西湖大学申请的专利一种高通量获取实验动物胚胎心脏三维结构的成像方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118937023B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410538215.2,技术领域涉及:G01N1/28;该发明授权一种高通量获取实验动物胚胎心脏三维结构的成像方法是由施红军;刘向阳设计研发完成,并于2024-04-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种高通量获取实验动物胚胎心脏三维结构的成像方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种高通量获取实验动物胚胎心脏三维结构的成像方法,包括以下步骤:1收集实验动物的胚胎心脏,使用固定液进行固定;2步骤1固定后的胚胎心脏进行脱水或脱脂后再进行透明化处理;3将透明化处理后的胚胎心脏放入透明管中,然后放入内部灌注有折射率为1.41~1.47的透明溶液的成像室中,进行荧光成像。本发明优化了样本固定及透明化方法,可以实现快速处理,实现高通量获取胚胎心脏三维结构的目的。固定方法及透明化方法均未使胚胎心脏发生明显形变,可以放置较长时间。
本发明授权一种高通量获取实验动物胚胎心脏三维结构的成像方法在权利要求书中公布了:1.一种高通量获取实验动物胚胎心脏三维结构的成像方法,其特征在于,包括以下步骤:1收集实验动物的胚胎心脏,使用固定液进行固定;所述实验动物为小鼠;2步骤1固定后的胚胎心脏进行脱水或脱脂后再进行透明化处理;3将透明化处理后的胚胎心脏放入透明管中,然后放入内部灌注有折射率为1.41~1.47的透明溶液的成像室中,进行荧光成像;若胚胎心脏没有表达外源荧光蛋白,则使用增强组织自发荧光的方法成像;若胚胎心脏表达外源荧光蛋白,则使用该外源荧光蛋白对应的激发光进行荧光成像;若胚胎心脏没有表达外源荧光蛋白,则使用增强组织自发荧光的方法成像,此时:步骤2中,先使用缓冲液冲洗后,进行脱水,然后再进行脱脂和透明化处理;脱水使用浓度依次提高直到纯酒精的酒精溶液进行梯度脱水,使用苯甲醇∶苯甲酸苄酯溶液进行脱脂和透明化处理30min;若胚胎心脏表达外源荧光蛋白,则使用该外源荧光蛋白对应的激发光进行荧光成像,此时:步骤2中,脱脂使用浓度依次提高的四氢呋喃溶液进行梯度脱脂;使用碘海醇-尿素溶液进行透明化处理1h;脱水使用浓度依次提高直到纯酒精的酒精溶液进行梯度脱水时,设置酒精的体积浓度梯度依次为50%、75%、90%、100%和100%;每个体积浓度梯度处理时间为30min;苯甲醇∶苯甲酸苄酯溶液中苯甲醇与苯甲酸苄酯的体积比为1∶2;脱脂使用浓度依次提高的四氢呋喃溶液进行梯度脱脂时,对于未超过E12.5天的胚胎心脏,设置四氢呋喃溶液的体积浓度梯度依次为10%、20%、30%;对于超过E12.5天的胚胎心脏,再增加体积浓度梯度40%;每个体积浓度梯度处理时间为30min;碘海醇-尿素溶液的成分为每5g碘海醇和2.625g尿素溶于2ml0.03M的PBS缓冲液中;荧光成像时,利用ZEISSLightsheetZ1光片显微镜平台进行荧光成像,使用X50.16空气检测镜头和X50.1照明镜头;成像室中灌注体积浓度为87%的甘油水溶液;荧光成像时,将ZEISSLightsheetZ1光片显微镜平台自带的样品固定杆底面端部固定第一磁铁,使用取样杆来将透明管固定在所述样品固定杆上,所述取样杆具有一定弹性,顶面设有用于与所述第一磁铁异性相吸固定的第二磁铁,底部具有用于与透明管内腔插接配合、直径从上到下逐渐减小的插接段。
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