郑州玛特瑞斯生物科技有限公司李亚倩获国家专利权
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龙图腾网获悉郑州玛特瑞斯生物科技有限公司申请的专利高通量测序文库构建用反应试剂、文库构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117417980B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311243940.9,技术领域涉及:C12Q1/6806;该发明授权高通量测序文库构建用反应试剂、文库构建方法是由李亚倩;王亚文;张银;张晓亮;张瑞峰设计研发完成,并于2023-09-25向国家知识产权局提交的专利申请。
本高通量测序文库构建用反应试剂、文库构建方法在说明书摘要公布了:本发明涉及高通量测序技术领域,具体涉及高通量测序文库构建用反应试剂、文库构建方法。本发明反应试剂通过创造性调整反应体系的pH≤7.2,并调整反应体系的组分和浓度,实现混合酶与反应buffer体系制作为单管试剂保存不易出现沉淀;同时本发明反应试剂具有很好的兼容性,对文库制备的后续流程无抑制作用,提升文库构建的效率和稳定性;具体的,本发明反应体系中的二价阳离子、一价阳离子、PEG8000、多羟基化合物和三甲胺N‑氧化物作为混合酶的活性稳定性和促进剂,相互之间发挥协同增效作用,实现对低起始浓度样本的高效文库构建,样本中DNA片段的起始浓度含量可以低至100pg,满足高底物转化效率的应用项目需求。
本发明授权高通量测序文库构建用反应试剂、文库构建方法在权利要求书中公布了:1.一种高通量测序文库构建用反应试剂,其特征在于,由混合酶与反应buffer体系混合制备而成;其中混合酶包括常温DNA聚合酶、多核苷酸激酶、耐热DNA聚合酶;反应buffer体系中包括400~550mM的Tris-HCl,60~120mM的二价阳离子,300~500mM的一价阳离子,60~100mM多羟基化合物,5~10mMPEG8000,10~20mM三甲胺N-氧化物,80~150mMDTT,6~15mMATP,1.0~2.0mMdNTPs,5mM~10mMdATP;所述反应试剂的pH=6.9~7.2;常温DNA聚合酶为T4DNA聚合酶;多核苷酸激酶为T4PNK;耐热DNA聚合酶为TaqDNA聚合酶;所述多羟基化合物为松三糖;所述二价阳离子为Mg2+;所述一价阳离子为Na+和K+,其中Na+和K+的比例为2:1;所述反应buffer体系中还包括20~30mM非离子表面活性剂;所述非离子表面活性剂为Triton-x-100和吐温20按照质量比2:1的混合物。
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