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龙图腾网获悉南开大学申请的专利基于热蛋白组学技术的D-蛋白质规模化筛选方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119147764B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411189142.7，技术领域涉及：G01N33/68；该发明授权基于热蛋白组学技术的D-蛋白质规模化筛选方法是由李功玉;李若萌;秦伟达;许霞设计研发完成，并于2024-08-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于热蛋白组学技术的D-蛋白质规模化筛选方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于热蛋白组学技术的D‑蛋白质规模化筛选方法，其包括：步骤一、通过向细胞中分别加入蛋白处理剂和不加入蛋白处理剂，得到D‑蛋白质上调组和空白组；步骤二、利用热蛋白质组学技术，获取热稳定性差异蛋白列表；步骤三、利用异构检索技术，获取立体异构蛋白列表；步骤四、将热稳定性差异蛋白列表与立体异构蛋白列表进行比对分析，得潜在D‑蛋白质；步骤五、基于APM酶切技术，获取潜在D‑蛋白质的D位点。本发明通过热蛋白质组学技术实现高通量、高覆盖度的D‑蛋白质的规模化鉴定方法，并能对D‑氨基酸位点进行精确定位，对疾病生物标志物的探寻和重大疾病发病机制探索等均具有重要意义。

本发明授权基于热蛋白组学技术的D-蛋白质规模化筛选方法在权利要求书中公布了：1.基于热蛋白组学技术的D-蛋白质规模化筛选方法，其特征在于，包括：步骤一、通过向细胞中分别加入蛋白处理剂和不加入蛋白处理剂，得到D-蛋白质上调组和空白组；具体为：取对数生长期的细胞，进行培养至细胞贴壁，均分为两组，向其中一组中加入30μM蛋白处理剂得D-蛋白质上调组，另外一组不加入蛋白处理剂得空白组；步骤二、基于D-蛋白质上调组和空白组，利用热蛋白质组学技术，获取热稳定性差异蛋白列表，具体为：S201、将D-蛋白质上调组和空白组分别悬浮于缓冲溶液中，随后向缓冲溶液中加入蛋白酶抑制剂，通过液氮反复冻融三次后，离心收集第一上清液，分别得D-蛋白质上调组蛋白溶液和空白组蛋白溶液；S202、将D-蛋白质上调组蛋白溶液空白组蛋白溶液均分至多个试管中，多个试管分别置于不同温度下进行热处理，对热处理后的每个试管进行离心收集第二上清液；S203、利用尿素对每个第二上清液进行变性处理，随后利用DTT和IAA进行烷基化处理，对变性烷基化处理后的每个第二上清液进行酶解，离心收集肽段溶液，经除盐后复溶于甲酸溶液中，得多肽分析样品；S204、对每个多肽分析样品进行LC-MSMS检测分析，采集蛋白组学数据集，依次采用TPP数据分析以及响应曲线的非参数数据分析方法，对蛋白组学数据集进行分析，获取热稳定性差异蛋白列表；步骤三、利用异构检索技术，获取立体异构蛋白列表，具体为：S301、从步骤S204获取的蛋白质组学数据集中获取最低温度对应的构象分辨蛋白组学数据，包括同一氨基酸序列的立体异构多肽保留时间信息、串联质谱信息、碰撞横截面积以及立体异构体信号响应强度；S302、将所述构象分辨蛋白组学数据中的氨基酸序列通过搜索蛋白质数据库生成的数据集进行特征提取，得到蛋白质样本的多条特征数据，以建立蛋白质样本异构修饰检索的特征集，每条特征数据均包括蛋白质名称、氨基酸序列、色谱的保留时间、电荷、信号响应强度、质荷比和二级质谱图；S303、对于同一个氨基酸序列下的特征数据，删除保留时间差值小于2min和或碰撞横截面积差值小于1.5%的数据，获取立体异构蛋白列表；步骤四、将步骤二得到的热稳定性差异蛋白列表与步骤三得到的立体异构蛋白列表进行比对分析，并取二者的交集，得潜在的D-蛋白质；步骤五、基于APM酶切技术，获取步骤四得到潜在的D-蛋白质的D位点。

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