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龙图腾网获悉恩替(苏州)生物科技有限公司申请的专利一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118755673B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411142571.9，技术领域涉及：C12N5/10；该发明授权一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法及其应用是由江文正;惠心慧;薛敏;任耀军;陈怡然设计研发完成，并于2024-08-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法及其应用，包括以下步骤：S1、pLL3.7‑GPR132‑shRNA‑2干扰质粒的构建；S2、pLL3.7‑shRNA‑2‑NKG2D‑CAR、pLL3.7‑shRNA‑NC‑NKG2D‑CAR靶向质粒的构建；S3、慢病毒的包装和病毒滴度测定；S4、NK92细胞培养；S5、感染NK92细胞测定GPR132的干扰效率；S6、检测GPR132敲低的NK92对K562的杀伤能力；S7、检测GPR132敲低的NK92中活化因子的表达水平；S8、检测GPR132敲低的NK92的增殖和抗凋亡能力；S9、检测GPR132敲低的CAR‑NK的细胞毒性；S10、检测靶向人NKG2DL的NKG2D‑CAR‑NK细胞对结肠癌细胞的杀伤能力。本发明阐明了GPR132对NK功能的调控作用。在NK细胞中下调GPR132增强了NK细胞效应、增殖和抗凋亡能力，从而增强了NK细胞的细胞毒性。同时，在CAR‑NK的应用方面，GPR132的下调显著提高了CAR‑NK92的细胞毒性，瘤内存活能力和结肠癌清除能力。

本发明授权一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、pLL3.7-GPR132-shRNA-2干扰质粒的构建；S2、pLL3.7-shRNA-2-NKG2D-CAR和pLL3.7-shRNA-NC-NKG2D-CAR靶向质粒的构建；S3、慢病毒的包装和病毒滴度测定；S4、NK92细胞培养；S5、感染NK92细胞测定GPR132的干扰效率；S6、检测GPR132敲低的NK92对K562的杀伤能力；S7、检测GPR132敲低的NK92中活化因子的表达水平；S8、检测GPR132敲低的NK92的增殖和抗凋亡能力；S9、检测GPR132敲低的CAR-NK的细胞毒性；S10、检测靶向人NKG2DL的NKG2D-CAR-NK细胞对结肠癌细胞的杀伤能力；所述步骤S1中的pLL3.7-GPR132-shRNA-2干扰质粒的构建方法包括：S1.1、RNAi靶序列设计：在NCBI网站中查找到HomosapiensGprotein-coupledreceptor132GPR132的基因序号：EU432121.1，根据基因编号设计GPR132基因RNAi靶序列；shRNA-2的靶序列为GGTACTACTACGCCAGGTTCA；S1.2、根据靶序列设计干扰序列：基于筛选出的靶序列，按照如下原则设计和确定干扰序列：5端以G开头，设定G+C含量为30％～50％；根据pLL3.7载体的要求，1在正义链5’端加T重建U6启动子1位的T；2干扰靶序列后加Loop环“TTCAAGAGA”；3加入反转互补序列及终止信号“TTTTTT”；4在3’端再加上EcoRI酶切位点GAATTC以方便鉴定；5再补平XhoI酶切位点合成一对互补片段，将序列打乱设计NCNegativeControl序列；S1.3、构建干扰质粒pLL3.7-shRNA-2-EGFP和pLL3.7-shRNA-NC-EGFP：将设计好的靶寡核苷酸序列交至苏州金唯智生物科技有限公司合成靶序列的双链DNA序列，并将空载pLL3.7予以限制性内切酶HpaI、XhoI双酶切，经T4DNA连接酶连接构建重组质粒pLL3.7-shRNA-2-EGFP和pLL3.7-shRNA-NC-EGFP；所述步骤S2中的pLL3.7-shRNA-2-NKG2D-CAR和pLL3.7-shRNA-NC-NKG2D-CAR靶向质粒的构建方法如下：将pLL3.7-NKG2D-CAR载体用限制性内切酶XbaI、NheI双酶切后回收大片段，大片段值为6975bp，pLL3.7-shRNA-2-EGFP和pLL3.7-shRNA-NC-EGFP用限制性内切酶XbaI、NheI双酶切后回收小片段，经T4DNA连接酶连接得pLL3.7-shRNA-2-NKG2D-CAR和pLL3.7-shRNA-NC-NKG2D-CAR质粒。

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