北京航空航天大学杭州创新研究院;杭州乐为生医科技有限公司高阳获国家专利权
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龙图腾网获悉北京航空航天大学杭州创新研究院;杭州乐为生医科技有限公司申请的专利一种改进邻位连接技术检测效率的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120028539B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510519709.0,技术领域涉及:G01N33/543;该发明授权一种改进邻位连接技术检测效率的方法是由高阳;韩改净设计研发完成,并于2025-04-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种改进邻位连接技术检测效率的方法在说明书摘要公布了:本发明属于生物检测技术领域,具体涉及一种改进邻位连接技术检测效率的方法,包括采用微珠包被抗体的形式来富集靶分子,并与邻位探针结合,随后使用夹板探针来连接处于邻位的探针,最后通过qPCR检测确定靶分子的存在和数量。本发明的方法不仅可以检测到低丰度的靶分子,而且与常规方法相比具有更高的检测准确度。
本发明授权一种改进邻位连接技术检测效率的方法在权利要求书中公布了:1.一种改进邻位连接技术检测效率的方法,其特征在于,包括以下步骤: (a)提供微珠复合物,所述微珠复合物包含: (i)微珠载体; (ii)固定在所述微珠表面的特异性结合靶分子的第一抗体; (b)将所述微珠复合物与待测样品孵育,使得所述第一抗体与靶分子结合; (c)将所述微珠复合物与待测样品分离,得到结合了靶分子的微珠复合物; (d)将结合了靶分子的微珠复合物与第一邻位探针和第二邻位探针孵育,所述第一邻位探针包含偶联至第一寡核苷酸的5’端的第二抗体,所述第二邻位探针包含偶联至第二寡核苷酸的3’端的第三抗体,所述第二抗体和第三抗体各自结合所述靶分子上的不同表位或各自结合与所述靶分子相互作用的另一靶分子上的不同表位,从而得到结合了第一邻位探针和第二邻位探针的微珠复合物; 将微珠复合物与包含夹板探针、DNA连接酶和引物的qPCR反应体系一起孵育并进行qPCR反应,从而确定靶分子或相互作用的两种靶分子的存在; (e)将步骤(d)的微珠复合物与夹板探针孵育,所述夹板探针由位于两端的短发夹和位于中间的杂交区组成,所述杂交区包含分别与第一寡核苷酸的3’端和第二寡核苷酸的5’端互补的互补序列,使得第一寡核苷酸的3’端和第二寡核苷酸的5’端通过与夹板探针杂交而相互邻近;第一寡核苷酸的序列如SEQIDNO:1所示,第二寡核苷酸的序列如SEQIDNO:2所示,夹板探针的序列如SEQIDNO:3所示; 所述夹板探针两端的短发夹各自具有长度为4-6个碱基的环和长度为4-6个碱基对的反向互补双链,并且所述夹板探针中间的杂交区的分别与第一寡核苷酸的3’端和第二寡核苷酸的5’端互补的互补序列的长度为4-6个碱基; (f)将步骤(e)的微珠复合物与DNA连接酶孵育,使得邻近的第一寡核苷酸的3’端与第二寡核苷酸的5’端连接在一起; (g)将步骤(f)的微珠复合物与包含各自与第一寡核苷酸和第二寡核苷酸互补的引物的qPCR反应体系混匀,并进行qPCR反应,从而确定靶分子或相互作用的两种靶分子的存在。
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