北京阅微基因技术股份有限公司;中国农业大学;石家庄天泉良种奶牛有限公司俞英获国家专利权
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龙图腾网获悉北京阅微基因技术股份有限公司;中国农业大学;石家庄天泉良种奶牛有限公司申请的专利一种牛乳房炎抗性和早期胚胎性别同检方法及其试剂盒获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118957094B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-01发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411227699.5,技术领域涉及:C12Q1/6888;该发明授权一种牛乳房炎抗性和早期胚胎性别同检方法及其试剂盒是由俞英;杨志攀;张奇;陶欣月;李树静;余文莉设计研发完成,并于2024-09-03向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种牛乳房炎抗性和早期胚胎性别同检方法及其试剂盒在说明书摘要公布了:本申请属于核酸检测技术领域,具体涉及一种牛乳房炎抗性和早期胚胎性别同检的方法及其试剂盒。本申请利用自制裂解液和中和液对样本进行前处理,采用Phi29酶进行全基因组扩增,随后基于开发的引物体系进行多重PCR扩增,最后结合毛细管电泳实现共检测。本申请只需4‑10个胚胎细胞即可满足检测要求,实现了牛早期胚胎性别及牛乳房炎抗性同步检测,具有灵敏度高和特异性强等优势。
本发明授权一种牛乳房炎抗性和早期胚胎性别同检方法及其试剂盒在权利要求书中公布了:1.一种用于牛乳房炎抗性和早期胚胎性别同检的试剂盒,其特征在于,包含引物组合物;还包含细胞裂解液、中和液以及Phi29DNA聚合酶;所述细胞裂解液包含300-500mM的KOH、75-125mM的DDT和7.5-12.5mM的EDTA;所述中和液包含200-400mM的Tris-Hcl,150-250mM的Hcl及200-500mM的Kcl;所述试剂盒中还包括:10×Phi29MAXDNAPolymeraseReaction,MdNTP,Exo-ResistantRandomPrimer和2×PCRMasterMix; 所述引物针对SNP位点和性别鉴定基因;所述SNP位点为CD4基因的Chr5:104010752CT、TRAPPC9基因的Chr14:2525852TG和TRAPPC9基因的Chr14:2711615GA;所述性别鉴定基因为Amel基因; 所述SNP位点的引物序列如下: Chr5:104010752CT位点引物: C分型引物:5’-AGGGGGAATCAGAAAAGGAATC-3’, T分型引物: 共用引物:5’-AGCTCCCAGGCTCAATAATTGT-3’; Chr14:2525852TG位点引物: T分型引物:5’-GCGCAGTTCTCCTGGAGCTTTCT-3’, G分型引物: 共用引物:5’-ACCATAATATAAAGAAGTAAAACAGCTCCCT-3’; Chr14:2711615GA位点引物: G分型引物:5’-AGCAGGCTAGGTCTCACGTTGAC-3’, A分型引物: 共用引物:5’-AGAGTGACTACTACCATCCAGTT-3’; 其中,所述“-”单下划线表示错配碱基,所述“=”双下划线表示增加的碱基; 所述Amel基因的引物序列如下: X分型正向引物:5’-ACAGCTTTGTTCTATCCCAGCC-3’, X分型反向引物:5’-AGAGTGTGACTATCTTAGAATTG-3’, Y分型正向引物:5’-ACAACTTTGCACTGTCCCAGAC-3’, Y分型反向引物:5’-AGAGTGTGAAACATCTTAGAATCA-3’; 所述引物被荧光标记;所述荧光标记位于共用引物的5’端,和性别鉴定基因反向引物的5’端;所述荧光标记为FAM荧光标记。
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