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龙图腾网获悉河南工业大学申请的专利一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测AFB1的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117625754B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-01发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311752440.8，技术领域涉及：C12Q1/6844；该发明授权一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测AFB1的方法是由金华丽;张柳祎;李嘉怡;索志光;白天;郭蕊;卫敏;何保山设计研发完成，并于2023-12-19向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测AFB1的方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种基于三链体‑锁型探针结合滚环扩增（RCA）和催化发夹组装（CHA）双循环的荧光适配体传感器的制备方法及应用。本发明所述的适配体传感器，包括DNA三链体结构、圆形模板链，发夹探针HP1、HP2，其中HP2为6‑FAM,BHQ‑1双端标记发夹。DNA三链体结构由适配体链和触发链组成，触发链可以在目标物黄曲霉毒素B1（AFB1）存在的情况下，启动RCA扩增反应，并进一步出发CHA反应，使原本猝灭的荧光信号得以恢复。本发明所述的AFB1适配体传感器，巧妙的运用了DNA三链体结构，结合RCA‑CHA级联扩增反应，在双重放大信号的同时有效的降低了反应的背景信号，从而实现了对食品中AFB1的灵敏检测。

本发明授权一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测AFB1的方法在权利要求书中公布了：1.一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测食品中的AFB1的方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）三链体-锁型结构的制备：将适配体链和引物链加入到灭菌的离心管中，加入Tric-HCl缓冲溶液进行恒温孵育，组装成三链体-锁型结构，制备完成后将其置于低温环境下保存，所述的三链体-锁型结构的适配体链序列为SEQIDNO.1：5’-CTCTCTTGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCTCTCTC-3’；SEQIDNO.2：5’-CTCTCTCTGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCTCTCTC-3’；SEQIDNO.3：5’-CTCTCTCTTGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCTCTCTCTC-3’；SEQIDNO.4：5’-CTCTCTCTCTGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCTCTCTCTC-3’中的一种，所述的引物链序列为SEQIDNO.5所示：具体为5’-GAGAGAGAGAGAGACGAGCAGAGTTAGGGTT-3’； （2）DNA链H1、DNA链H2的预处理：H1、H2经活化配置成母液，使用前应经过退火处理，形成发夹结构，所述的DNA链H1序列为5’-CCCTAACCCTAACTCTCAAGGGTAGGGCGGGTCAGAGTTAGGG-3’；所述的DNA链H2序列为5’-FAM-AACTCTACCCGCCCTACCCTTGAGAGTTAGGGAGGGTAGGGCGGGT-BHQ-1-3’，具体步骤为：取H1和H2分别加入到两个灭菌离心管中，在每个离心管中分别加入Tris-HCl缓冲溶液，将离心管进行高温退火，退火完成后静置使其缓慢冷却至室温，获得反应产物，并将反应产物置于低温环境中保存； （3）荧光适配体传感器的构建：预先制备三链体-锁型结构，当样本中含有AFB1时，适配体链与AFB1特异性结合，打开“锁型”结构，释放出三链体-锁型结构中的引物链，用于启动环化的5’端磷酸化的圆形模板链，所述的圆形模板链序列为SEQIDNO.6所示：具体为5’-P-ACTCTGCTCGCCCTATCCCTAACCCTA-3’，加入Phi29DNA聚合酶体系溶液以及处理后的DNA链H1和DNA链H2，涡旋充分混合，制备得适配体传感器。

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