中国农业科学院植物保护研究所毛连纲获国家专利权
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龙图腾网获悉中国农业科学院植物保护研究所申请的专利马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度荧光定量PCR检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116004884B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-01发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210971821.4,技术领域涉及:C12Q1/6895;该发明授权马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度荧光定量PCR检测方法是由毛连纲;刘新刚;张兰;张浩楠;张燕宁;朱丽珍;蒋红云设计研发完成,并于2022-08-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度荧光定量PCR检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度荧光定量PCR检测方法。该方法中,检测马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度的荧光定量PCR引物组,由序列表中序列1所示的核苷酸和序列表中序列2所示的核苷酸组成。本发明的方法检测速度快、灵敏度高、特异性强,更有利于马铃薯种薯和土壤中粉痂病病菌休眠孢子囊的检测,为马铃薯粉痂病的预防提供依据。
本发明授权马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度荧光定量PCR检测方法在权利要求书中公布了:1.一种检测马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度的荧光定量PCR方法,包括下述步骤: 1)将待测样品用灭菌蒸馏水悬浮获得马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊悬浮液; 2)提取待测样品马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊悬浮液DNA; 3)以待测样品DNA为模板,用荧光定量PCR引物组进行荧光定量PCR检测,获得Ct值;荧光定量PCR引物组,由序列表中序列1所示的核苷酸和序列表中序列2所示的核苷酸组成; 4)将步骤3)获得的Ct值代入马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度与Ct值线性曲线关系y=-4.6904x+47.18,其中,y为Ct值,x=lgA,A为马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度,单位为个ml,换算得到待测样品悬浮液中马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊浓度; 所述步骤2)中,提取待测样品马铃薯粉痂病病菌休眠孢子囊悬浮液DNA的方法为液氮冷冻孢子囊悬浮液,研磨1min,沸水煮沸3-6min,14000rmin离心10min后,取上清作为DNA溶液; 所述荧光定量PCR的反应体系为50μL体系,包括模板1μL,Taq酶1μL,10μM序列表中序列1所示的核苷酸1μL,10μM序列表中序列2所示的核苷酸1μL,PCRBuffer5μL,dNTP4μL,ddH2O37μL; 所述荧光定量PCR的反应程序为:先95℃5min,然后95℃30s,58℃30s,72℃1min,36个循环,最后72℃10min。
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