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苏州纳微科技股份有限公司;常熟纳微生物科技有限公司陈阳雪获国家专利权

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龙图腾网获悉苏州纳微科技股份有限公司;常熟纳微生物科技有限公司申请的专利一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115125240B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-01发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210911987.7,技术领域涉及:C12N15/10;该发明授权一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用是由陈阳雪;梁笑荣;金百胜;朱建波设计研发完成,并于2022-07-29向国家知识产权局提交的专利申请。

一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用,所述方法包括如下步骤:将含有质粒DNA的细菌裂解液依次进行离子交换层析和疏水层析处理得到纯化的质粒DNA。本发明将离子层析和疏水层析两步法纯化工艺用于质粒DNA产品的纯化,不仅操作简便易放大,减少了操作步骤,同时提高了纯化质粒的总回收率,并符合药用标准。本发明所述分离纯化方法纯化效果好,重复性强,操作简单,可满足工业上产业化纯化生产要求,大大降低了生产成本,所述方法在质粒DNA工业化分离纯化中具有重要应用价值。

本发明授权一种质粒DNA工业化分离纯化方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种质粒DNA工业化分离纯化方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤: (1)对含有质粒DNA的细菌进行裂解,收集含有质粒DNA的细菌裂解液,离心,收集上清液; (2)将步骤(1)所得上清液上样至平衡后的离子交换层析柱中,依次使用洗杂缓冲液和洗脱缓冲液冲洗离子交换层析柱,收集含有质粒DNA的洗脱液;所述离子交换层析采用的离子交换层析填料为UniGel-30DEAE;所述离子交换层析柱采用4-6个柱体积的平衡缓冲液进行平衡; 所述平衡缓冲液按摩尔浓度计为48-52mMTris-HCl和8-12mMEDTA,pH为7.3-7.7,溶剂为水; 所述洗杂缓冲液按摩尔浓度计为48-52mMTris-HCl和8-12mMEDTA,pH为7.3-7.7,溶剂为水; 所述洗脱缓冲液包括依次升高盐浓度的洗脱缓冲液一和洗脱缓冲液二;所述洗脱缓冲液一按摩尔浓度计为48-52mMTris-HCl、8-12mMEDTA和0.8-1.2MNaCl,pH为7.3-7.7,溶剂为水;所述洗脱缓冲液二按摩尔浓度计为48-52mMTris-HCl、8-12mMEDTA和1.8-2.2MNaCl,pH为7.3-7.7,溶剂为水; (3)将步骤(2)所得含有质粒DNA的洗脱液上样至平衡后的疏水层析柱中,依次使用洗杂缓冲液和洗脱缓冲液冲洗疏水层析柱,收集含质粒DNA的洗脱液;所述疏水层析采用的疏水层析填料为UniHRPhenyl-30L;所述疏水层析柱采用4-6个柱体积的平衡缓冲液进行平衡; 所述平衡缓冲液按摩尔浓度计为1.8-2.2M硫酸铵和18-22mMTris-HCl,pH为7.8-8.2,溶剂为水; 所述洗杂缓冲液按摩尔浓度计为1.8-2.2M硫酸铵和18-22mMTris-HCl,pH为7.8-8.2,溶剂为水; 步骤(3)中,所述洗脱缓冲液包括第一洗脱缓冲液和第二洗脱缓冲液;所述第一洗脱缓冲液按摩尔浓度计为1.3-1.7M柠檬酸三钠和18-22mMTris-HCl,pH为7.8-8.2,溶剂为水;所述第二洗脱缓冲液按摩尔浓度计为1.8-2.2M硫酸铵和18-22mMTris-HCl,pH为7.8-8.2,溶剂为水。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人苏州纳微科技股份有限公司;常熟纳微生物科技有限公司,其通讯地址为:215026 江苏省苏州市工业园区百川街2号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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