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龙图腾网获悉沈阳农业大学申请的专利农田土壤游离病毒显微计数的优化方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119413772B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-15发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411561903.7，技术领域涉及：G01N21/64；该发明授权农田土壤游离病毒显微计数的优化方法是由刘灵芝;王丰;梁敏杰;刘蕊;汪景宽设计研发完成，并于2024-11-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本农田土壤游离病毒显微计数的优化方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种农田土壤游离病毒显微计数的优化方法，属于生物试验技术领域。该方法从土壤病毒提取试验中的仪器选择、参数设置、土壤样品使用量以及显微观察关键影响因子这几个方面进行试验，分析农田土壤样品与病毒浸提液的比例、不同振荡仪器及参数设置、以及显微观察中防荧光淬灭剂和防褪色液对土壤病毒提取效率和显微计数的影响，根据分析结果优化农田土壤游离病毒显微计数的过程。本发明可以从土壤病毒提取中仪器选择与参数设置、土壤样品使用量以及显微观察中关键影响因子控制入手，提出一种适宜农田土壤病毒荧光染色‑显微计数法的操作流程，可为后续土壤病毒的定量分析和侵染方式研究提供可行的技术参考。

本发明授权农田土壤游离病毒显微计数的优化方法在权利要求书中公布了：1.一种农田土壤游离病毒显微计数的优化方法，其特征在于，所述方法的步骤包括： S1、称取50质量份农田土壤样品，置于含100体积份1％柠檬酸钾溶液中，使用手持搅拌棒搅拌3min，设置参数为650W、50Hz； S2、对S1获得土壤浸提液进行离心处理； S3、获取离心后的上清液并经针孔滤膜进行过滤； S4、向过滤后溶液中加入优化液和DNase1，再进行特定温度的水浴反应；所述优化液为能够去除游离DNA的溶液； S5、向S4水浴后溶液中加入EDTA溶液，再进行特定温度的水浴反应； S6、室温冷却； S7、滤泵处理：在滤泵上放置滤膜，加入HPLC水进行抽滤、平衡滤泵气压，然后在滤膜上加入S6的溶液进行抽滤、平衡滤泵气压； S8、在滤膜上加入核酸荧光染料，避光染色；然后抽滤、平衡滤泵气压，再用无菌HPLC水冲洗； S9、取出滤膜，避光晾干； S10、载玻片上滴加无菌HPLC水，其上放置晾干的滤膜，滤膜上滴加防荧光淬灭剂和防褪色剂，盖上盖玻片； S11、使用荧光显微镜进行游离病毒观察并计数； 所述防荧光淬灭剂为水溶性的抗荧光淬灭封片剂； 所述防褪色剂的制备方式为：将无水乙醇和S---α-甲基苄胺按体积比1000:1混合均匀制成防褪色原液，将所述防褪色原液和甘油-磷酸盐缓冲液按体积比100:1混合均匀，通过微孔滤膜过滤，得到所述防褪色剂。

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