云南农业大学和四梅获国家专利权
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龙图腾网获悉云南农业大学申请的专利灯盏花Cas9基因编辑体系的构建方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120138004B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-22发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510627677.6,技术领域涉及:C12N15/53;该发明授权灯盏花Cas9基因编辑体系的构建方法与应用是由和四梅;卢迎春;朱琴;张尚林;宋家瑶;张广辉;龚荣;张旭高设计研发完成,并于2025-05-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本灯盏花Cas9基因编辑体系的构建方法与应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种灯盏花Cas9基因编辑体系的构建方法与应用,包括以下步骤:选取灯盏花EbPDS基因序列并设计靶位点,以PGTR质粒为模板进行扩增目标片段,通过同源重组将片段连接到表达载体PV58‑Cas9上,将灯盏花叶片外植体置于含有PV58‑Cas9‑EbPDS农杆菌的悬浮侵染液中侵染,再分别经过灯盏花共培养基、延迟筛选培养基和筛选培养基中进行培养,得到转基因成功的新生愈伤组织。本发明的优点是:(1)重组质粒PV58‑Cas9‑EbPDS构建的基因编辑体系高效可行;(2)EbPDS基因成功应用于CRISPRcas9介导的基因组编辑,通过观察后代植株是否出现白化表型现象,能快速筛选出特定基因型的个体,为灯盏花基因功能研究和基因编辑育种提供了重要手段。
本发明授权灯盏花Cas9基因编辑体系的构建方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种灯盏花Cas9基因编辑体系的构建方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、选取灯盏花EbPDS基因,根据基因序列设计EbPDS基因靶位点,根据靶位点设计PCR扩增引物; S2、以PGTR质粒为模板进行EbPDS基因扩增,通过同源重组将EbPDS扩增片段连接到载体PV58-Cas9上,获得重组质粒PV58-Cas9-EbPDS; S3、将构建的重组质粒PV58-Cas9-EbPDS通过电转化转入大肠杆菌DH5α,接着将重组质粒PV58-Cas9-EbPDS转化农杆菌EHA105并进行培养,经过菌落PCR筛选阳性克隆,获得PV58-Cas9-EbPDS农杆菌,将灯盏花叶片外植体置于含有PV58-Cas9-EbPDS农杆菌的侵染液中进行侵染;所述EbPDS基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示;EbPDS基因所编码的蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。
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