海南大学三亚南繁研究院;海南大学三亚研究院王洪星获国家专利权
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龙图腾网获悉海南大学三亚南繁研究院;海南大学三亚研究院申请的专利基于RPA-LFD技术的槟榔黄化相关病毒的检测系统及方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120192964B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510669060.0,技术领域涉及:C12N15/11;该发明授权基于RPA-LFD技术的槟榔黄化相关病毒的检测系统及方法是由王洪星;温佳伟;李诗琪;曹先梅;黄惜设计研发完成,并于2025-05-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于RPA-LFD技术的槟榔黄化相关病毒的检测系统及方法在说明书摘要公布了:本发明涉及植物病毒检测技术领域,尤其涉及一种基于RPA‑LFD技术的槟榔黄化相关病毒的检测系统及方法。检测槟榔黄化病毒APV1的引物组,其特征在于:包括特异性引物对;特异性引物对中上游引物的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.1所示,下游引物的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.2所示;还包括探针;所述探针经生物素或FAM荧光基团标记修饰;经修饰后的探针核苷酸序列如序列表SEQIDNo.3所示。优点在于:检测方面具有较高的特异性和较低的检测限,与槟榔坏死环斑病毒等其他病毒无交叉反应;该引物探针组合适用于RPA‑LFD检测,扩增反应所需时间较短;反应结果会表现在试纸条上,裸眼即可观察。
本发明授权基于RPA-LFD技术的槟榔黄化相关病毒的检测系统及方法在权利要求书中公布了:1.一种基于RPA-LFD技术快速检测槟榔黄化病毒APV1的方法,采用一种快速检测槟榔黄化病毒APV1的检测系统,其特征在于:具体包括如下步骤: S1.样品粗提:取50~100mg槟榔叶片组织于研钵中,加入样本缓释液研磨获得粗提液,从待测样品中粗提病毒RNA; S2.等温扩增:以步骤S1获得的RNA为模板,加入包含特异性引物对和探针的RPA反应体系,将离心管插入恒温扩增装置中的离心管管架,通过温度调节按钮调节温度,在37~44℃进行等温扩增反应; 特异性引物对中上游引物的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.1所示,下游引物的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.2所示;经修饰后的探针核苷酸序列如序列表SEQIDNo.3所示;所述下游引物的5'端修饰有Biotin基团; 所述反应体系包括如下组分和用量: RPA反应的反应时间为10±2min;RPA反应的反应温度为恒温37~44℃; S3.层析检测:将扩增产物用纯水稀释后滴加至试纸条加样区,10~15分钟内观察显色结果;其中,检测结果的判定标准为: 当试纸条质控线显色且检测线无显色时,判定为APV1阴性; 当试纸条质控线和检测线同时显色时,判定为APV1阳性; 采用侧向流动免疫试纸条进行检测的温度为室温,时间为10±1min。
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