北京大学第一医院(北京大学第一临床医学院)肖冰冰获国家专利权
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龙图腾网获悉北京大学第一医院(北京大学第一临床医学院)申请的专利用于实时荧光定量PCR的组合物及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119876355B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-29发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510361510.X,技术领域涉及:C12Q1/686;该发明授权用于实时荧光定量PCR的组合物及其应用是由肖冰冰;赵雨航;陈超;唐羚容设计研发完成,并于2025-03-26向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于实时荧光定量PCR的组合物及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供一种用于实时荧光定量PCR的组合物及其应用,属于核酸或微生物的测定或检验领域。本发明提供的用于实时荧光定量PCR的组合物,包括特异性正向引物、特异性反向引物和特异性探针,其中,特异性正向引物和特异性反向引物用于扩增靶DNA,特异性反向引物3’端起第i个核苷酸和第(i+1)个核苷酸之间添加阻断基团,4≤i≤8;特异性探针的两端分别标记有荧光基团和第二淬灭基团,中间标记有第一淬灭基团,且所述特异性探针的部分序列与所述反向引物的部分序列相同。基于上述组合物进行实时荧光定量PCR,结合特异性探针所携带的荧光基团类型与各靶标PCR产物的不同熔解温度,实现多重靶标检测。
本发明授权用于实时荧光定量PCR的组合物及其应用在权利要求书中公布了:1.用于检测人乳头瘤病毒的组合物,其特征在于,包括用于检测HPV58型的第一组合物、用于检测HPV56型的第二组合物、用于检测HPV52型的第三组合物、用于检测HPV59型的第四组合物、用于检测HPV39型的第五组合物、用于检测HPV68型的第六组合物、用于检测HPV16型的第七组合物、用于检测HPV33型的第八组合物、用于检测HPV31型的第九组合物、用于检测HPV45型的第十组合物、用于检测HPV18型的第十一组合物、用于检测HPV66型的第十二组合物、用于检测HPV35型的第十三组合物和用于检测HPV51型的第十四组合物中的至少一种; 所述第一组合物包括用于检测HPV58型的第一正向引物、第一反向引物和第一探针;所述第二组合物包括用于检测HPV56型的第二正向引物、第二反向引物和第一探针;所述第三组合物包括用于检测HPV52型的第三正向引物、第三反向引物和第二探针;所述第四组合物包括用于检测HPV59型的第四正向引物、第四反向引物和第二探针;所述第五组合物包括用于检测HPV39型的第五正向引物、第五反向引物和第二探针;所述第六组合物包括用于检测HPV68型的第六正向引物、第六反向引物和第二探针;所述第七组合物包括用于检测HPV16型的第七正向引物、第七反向引物和第三探针; 所述第八组合物包括用于检测HPV33型的第八正向引物、第八反向引物和第三探针;所述第九组合物包括用于检测HPV31型的第九正向引物、第九反向引物和第三探针;所述第十组合物包括用于检测HPV45型的第十正向引物、第十反向引物和第三探针;所述第十一组合物包括用于检测HPV18型的第十一正向引物、第十一反向引物和第四探针; 所述第十二组合物包括用于检测HPV66型的第十二正向引物、第十二反向引物和第四探针; 所述第十三组合物包括用于检测HPV35型的第十三正向引物、第十三反向引物和第四探针; 所述第十四组合物包括用于检测HPV51型的第十四正向引物、第十四反向引物和第四探针; 所述第一正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:1所示的单链DNA; 所述第二正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:3所示的单链DNA; 所述第三正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:5所示的单链DNA; 所述第四正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:7所示的单链DNA; 所述第五正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:9所示的单链DNA; 所述第六正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:11所示的单链DNA; 所述第七正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:13所示的单链DNA; 所述第八正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:15所示的单链DNA; 所述第九正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:17所示的单链DNA; 所述第十正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:19所示的单链DNA; 所述第十一正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:21所示的单链DNA; 所述第十二正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:23所示的单链DNA; 所述第十三正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:25所示的单链DNA; 所述第十四正向引物是核苷酸序列为SEQIDNO:27所示的单链DNA; 所述反向引物的结构通式如式1所示: 5’-na-Y-nb-3’式1 式1中,na、nb为核苷酸序列不同的多核苷酸片段,Y为阻断基团; 所述第一反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:2,nb的核苷酸序列为GGACC; 所述第二反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:4,nb的核苷酸序列为TCTAC; 所述第三反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:6,nb的核苷酸序列为TTTCC; 所述第四反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:8,nb的核苷酸序列为GGTAG; 所述第五反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:10,nb的核苷酸序列为TCCAA; 所述第六反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:12,nb的核苷酸序列为CCCAG; 所述第七反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:14,nb的核苷酸序列为GGATG; 所述第八反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:16,nb的核苷酸序列为ATGCC; 所述第九反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:18,nb的核苷酸序列为CATCT; 所述第十反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:20,nb的核苷酸序列为GCATG; 所述第十一反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:22,nb的核苷酸序列为TGAAG; 所述第十二反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:24,nb的核苷酸序列为TCCC; 所述第十三反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:26,nb的核苷酸序列为CAATG; 所述第十四反向引物中,na的核苷酸序列为SEQIDNO:28,nb的核苷酸序列为CAACC; 所述第一探针是核苷酸序列为SEQIDNO:31的单链DNA,且SEQIDNO:31的第1位核苷酸标记有第一荧光基团,第13位核苷酸标记有第一淬灭基团,第49位核苷酸标记有第二淬灭基团; 所述第二探针是核苷酸序列为SEQIDNO:32的单链DNA,且SEQIDNO:32的第1位核苷酸标记有第二荧光基团,第12位核苷酸标记有第三淬灭基团,第57位核苷酸标记有第四淬灭基团; 所述第三探针是核苷酸序列为SEQIDNO:33的单链DNA,且SEQIDNO:33的第1位核苷酸标记有第三荧光基团,第12位核苷酸标记有第五淬灭基团,第57位核苷酸标记有第六淬灭基团; 所述第四探针是核苷酸序列为SEQIDNO:34的单链DNA,且SEQIDNO:34的第1位核苷酸标记有第四荧光基团,第13位核苷酸标记有第七淬灭基团,第59位核苷酸标记有第八淬灭基团。
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