深圳市中医院邵牧民获国家专利权
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龙图腾网获悉深圳市中医院申请的专利肾小管类器官培养基及应用、肾小管类器官的培养方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116218762B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-29发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310289514.2,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权肾小管类器官培养基及应用、肾小管类器官的培养方法是由邵牧民;江徐;余学问;孙惠力设计研发完成,并于2023-03-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本肾小管类器官培养基及应用、肾小管类器官的培养方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种肾小管类器官培养基及应用、肾小管类器官的培养方法。本发明的肾小管类器官培养基对于肾小管类器官的生长有较好的支持和促进作用,7天左右即可获得典型的肾小管类器官,在体外较好的保留了患者来源的组织一致性和异质性,为进一步进行肾小管研究应用奠定了基础;本发明的肾小管类器官的培养方法,采用本发明的肾小管类器官培养基进行培养,能够有效的模拟肾小管组织,可为肾小管相关疾病发病机理、致病因素研究和正常肾小管组织药物毒性研究提供强大平台;本发明的培养方法步骤简便清晰,操作人员对培养结果影响较小,提高了培养结果的一致性,为后续大规模培养提供了便利条件。
本发明授权肾小管类器官培养基及应用、肾小管类器官的培养方法在权利要求书中公布了:1.一种肾小管类器官的培养方法,其特征在于,包括以下步骤: 获取肾组织样本; 对肾组织样本进行清洗、消化、重悬,得到肾细胞沉淀; 将肾小管类器官培养基与肾细胞沉淀混合,得到细胞溶液; 将细胞溶液与Matrigel基质胶混合,然后接种至孔板中,接种完成后,静置直至Matrigel基质胶凝固; 待Matrigel基质胶凝固后,再加入肾小管类器官培养基进行培养,即得肾小管类器官; 对肾组织样本进行清洗、消化、重悬,得到肾细胞沉淀,具体包括以下步骤: 将肾组织样本剪碎后,使用含有青霉素链霉素双抗的DPBS溶液清洗; 向清洗后的肾组织样本中加入胰酶消化液,并于37℃、体积浓度为5%的CO2培养箱中消化40~50min,再加入AdvancedDMEMF12基础培养基终止消化,再经过离心分离,弃掉上清液,收集沉淀,即得肾细胞沉淀; 所述肾小管类器官培养基,包括基础培养基、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、pH缓冲剂、抗氧化剂、血清替代物、人重组蛋白、TGF-β受体抑制剂、生长因子、ROCK抑制剂;还包括原代细胞抗生素和青霉素链霉素双抗; 所述基础培养基为AdvancedDMEMF12基础培养基;所述pH缓冲剂为HEPES缓冲剂;所述抗氧化剂为N-乙酰半胱氨酸;所述血清替代物为B-27supplement;所述人重组蛋白为R-Spondin-3;所述TGF-β受体抑制剂为A83-01;所述生长因子包括EGF、FGF-10;所述ROCK抑制剂为Y27632;所述原代细胞抗生素为primocin; 所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的浓度为1~3mM,所述HEPES缓冲剂的浓度为10~25mM,所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为0.5~2mM,所述B-27supplement的体积浓度为1~2%,所述R-Spondin-3的浓度为200~250ngmL,所述A83-01的浓度为5~10μM,所述EGF的浓度为50~100ngmL,所述FGF-10的浓度为50~100ngmL,所述Y27632的浓度为5~10μM,所述primocin的浓度为80~120μgmL,所述青霉素链霉素双抗的浓度为50~100IUmL。
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