山东福洋生物科技股份有限公司张雷达获国家专利权
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龙图腾网获悉山东福洋生物科技股份有限公司申请的专利一种生产D-阿洛酮糖-3差向异构酶的补料培养基及补料方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116179527B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-29发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211697295.3,技术领域涉及:C12N9/90;该发明授权一种生产D-阿洛酮糖-3差向异构酶的补料培养基及补料方法是由张雷达;李纪伟;赵伟;曹乐梅;齐丹萍;方健;张虎设计研发完成,并于2022-12-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种生产D-阿洛酮糖-3差向异构酶的补料培养基及补料方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种生产D‑阿洛酮糖‑3差向异构酶的补料培养基及补料方法,属于微生物发酵技术领域。本发明采用特定比例的葡萄糖、玉米浆、黄豆饼粉及微量元素制作成一定碳氮比且同时具有速效氮源、迟效氮源及微量元素的补料培养基,并以枯草芽孢杆菌为发酵菌种,在发酵过程中,采用流加的方式加入补料,同时通过发酵过程中pH‑溶氧‑补料偶联调控,尽可能的提高菌体浓度和D‑阿洛酮糖‑3差向异构酶的活性。本发明方法操作简单,降低了生产成本,缩短了发酵周期,显著提高了目的酶的酶活。
本发明授权一种生产D-阿洛酮糖-3差向异构酶的补料培养基及补料方法在权利要求书中公布了:1.一种以生产D-阿洛酮糖-3差向异构酶的补料培养基进行补料的方法,其特征在于,建立pH-溶氧-补料偶联调控发酵机制,具体步骤如下: 1将重组枯草芽孢杆菌按1%的接种量接种在LB培养基中,37℃、转速220rpm摇瓶培养6-10h,得到种子液,测其OD600nm=2.08-6.04; 2将种子液接种于发酵培养基中培养发酵,发酵初始pH值为6.02-6.5;该阶段通过控制DO使OD600nm以1-3h增长,控制发酵参数:温度37℃,通风比0.5VVM,罐压0.02或0.05Mpa,转速150或200rmin; 3发酵至OD600nm=5.04-14.97时,初始配料中的葡萄糖耗尽,溶氧回升至20.0%以上,开始流加补料;流加补料后,溶氧降至20%以下,进入菌体快速增长阶段,控制pH以0.05-0.11h下降,补料流加速度为100-150gL;本阶段控制发酵参数:温度37±0.5℃,罐压0.02~0.05Mpa,通过调节转速和风量控制DO10~20%; 4发酵15-25h,pH不再下降,进入D-阿洛酮糖-3差向异构酶生产阶段,控制pH以0.11-0.25h回升,补料流加速度为100-170gL;本阶段控制发酵参数:温度37±0.5℃,罐压0.02~0.05Mpa,通过调节转速和风量控制DO10~20%; 5发酵38-45h,pH回升至8.02-8.51,OD600nm=151.4-197.4,停止流加补料; 6发酵45-50h,溶氧回升至40%以上,HPLC检测胞外酶活达到801.2-1002.3UML,结束发酵; 7发酵液离心得到粗酶液; 所述生产D-阿洛酮糖-3差向异构酶的补料培养基,由如下原料组成:葡萄糖、玉米浆、黄豆饼粉和微量元素,其中微量元素相对于车间葡萄糖的添加量为0.15-0.5gL,黄豆饼粉和玉米浆的比例m:v为50-100:1,最终混合补料碳氮比为5-10:1,pH为4.06-4.51。
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