广东中芯种业科技有限公司;温氏食品集团股份有限公司杨化强获国家专利权
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龙图腾网获悉广东中芯种业科技有限公司;温氏食品集团股份有限公司申请的专利猪黑毛基因分子标记及黑色被毛杜洛克猪的制备和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115109857B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-08-29发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210820997.X,技术领域涉及:C12Q1/6888;该发明授权猪黑毛基因分子标记及黑色被毛杜洛克猪的制备和应用是由杨化强;吴珍芳;张健;钟海文;杨杰;蔡更元设计研发完成,并于2022-07-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本猪黑毛基因分子标记及黑色被毛杜洛克猪的制备和应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种猪黑毛基因分子标记及其在制备黑色被毛杜洛克猪、培育黑色被毛杜洛克猪新品系、猪的遗传改良等领域上的应用。该分子标记核苷酸序列如SEQIDNo:5所示,该序列中包括4个与黑色被毛性状相关的SNP位点。本发明通过基因编辑的方法,可以精准的实现上述4个SNP位点的等位替换,由此可以获得黑色被毛杜洛克猪,进而培育黑色被毛杜洛克猪新品系及对其他猪品种进行遗传改良。此方法不仅可以精准的获得杜洛克猪黑色被毛基因型和表型,还可以克服传统杂交育种选育时间长并会造成其他经济性状的改变等缺点,具有不可比拟的前瞻性和创造性。
本发明授权猪黑毛基因分子标记及黑色被毛杜洛克猪的制备和应用在权利要求书中公布了:1.黑色被毛杜洛克猪的制备方法,其中,所述制备方法包括如下步骤: 1)设计杜洛克猪MC1R基因靶向切割CRISPRCas9系统,识别切割位点为GGTGTCCAGCCTCTGCTTCC,并构建gRNA表达载体MC1R-gRNA_CloningVector,所述gRNA表达载体MC1R-gRNA_CloningVector核苷酸序列如SEQIDNo:2所示; 2)构建donor供体质粒,所述donor供体质粒核苷酸序列如SEQIDNo:3所示; 3)将gRNA表达载体MC1R-gRNA_CloningVector、donor供体质粒及hCas9质粒共转染杜洛克猪成纤维细胞; 4)筛选在MC1R基因上4个SNP位点具有单等位或双等位突变型的阳性杜洛克猪成纤维细胞,包含所述4个SNP位点的核苷酸序列如SEQIDNo:5所示,所述序列中第1个SNP位点用M显示碱基突变位置,其中M表示AG突变,第2个SNP位点用R显示碱基突变位置,其中R表示CT突变,第3个SNP位点用S显示碱基突变位置,其中S表示CT突变,第4个SNP位点用K和B显示碱基突变位置,其中K表示GA突变、B表示AG突变;在制备黑色被毛杜洛克猪时,4个SNP位点均产生等位替换:第1个SNP位点为A替换G,第2个SNP位点为C替换T,第3个SNP位点为C替换T,第4个SNP位点为G替换A和A替换G; 5)将步骤4)中筛选的阳性细胞作为核供体细胞进行体细胞克隆,制备成克隆猪,获得的阳性克隆猪即为可以表达黑色被毛基因的黑色被毛杜洛克猪。
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