杭州度安医学检验实验室有限公司;浙江大学医学院附属第二医院高飞获国家专利权
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龙图腾网获悉杭州度安医学检验实验室有限公司;浙江大学医学院附属第二医院申请的专利一种基于HPLC-MS/MS的视黄醇,全反式视黄酸,9-顺式视黄酸和全反式视黄醛检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116858963B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310850501.8,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种基于HPLC-MS/MS的视黄醇,全反式视黄酸,9-顺式视黄酸和全反式视黄醛检测方法是由高飞;董乐乐;张志栋;冯建华;苗圃;高柳燕;王烨设计研发完成,并于2023-07-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于HPLC-MS/MS的视黄醇,全反式视黄酸,9-顺式视黄酸和全反式视黄醛检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于HPLC‑MSMS的视黄醇,全反式视黄酸,9‑顺式视黄酸和全反式视黄醛检测方法,包括以下步骤:血液样本经处理后得到检测样本;利用HPLC‑MSMS检测添加内标溶液的标准曲线工作液得到目标待测物对应的标准曲线方程,利用HPLC‑MSMS对添加内标溶液的检测样本进行检测,利用标准曲线方程计算得到检测样本中目标待测物的含量;HPLC‑MSMS检测使用的色谱柱:ACEPFP柱;流动相A:甲醇:乙腈:水:甲酸=300:400:300:0.1;流动相B:甲醇:乙腈:水:甲酸=300:550:150:0.1。本发明的检测方法全反式视黄酸,9‑顺式视黄酸能够获得良好的液相分离度,能同时检测视黄醇,全反式视黄酸,9‑顺式视黄酸,全反式视黄醛,实现一针进样出结果,且特异性强,方法检测限低。
本发明授权一种基于HPLC-MS/MS的视黄醇,全反式视黄酸,9-顺式视黄酸和全反式视黄醛检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于HPLC-MSMS的视黄醇、全反式视黄酸、9-顺式视黄酸和全反式视黄醛检测方法,其特征在于:包括以下步骤: (1)配制目标待测物的标准储备溶液、标准曲线工作液以及内标溶液; (2)血液样本经处理后得到检测样本; (3)利用HPLC-MSMS对添加内标溶液的标准曲线工作液进行检测,以目标待测物与对应的同位素内标的色谱峰峰面积比为纵坐标,以标准曲线工作液中目标待测物的浓度为横坐标,分别拟合得到目标待测物对应的标准曲线方程,利用HPLC-MSMS对添加内标溶液的检测样本进行检测,根据对应的标准曲线方程计算得到检测样本中目标待测物的含量;其中,HPLC-MSMS检测的色谱条件为: 色谱柱:ACEPFP柱,100x2.1mm,2.6μm; 流动相A:甲醇:乙腈:水:甲酸=300:400:300:0.1; 流动相B:甲醇:乙腈:水:甲酸=300:550:150:0.1; Strongwash溶液:80%甲醇; 流速0.3mLmin,柱温为30℃,进样5μL; 采用梯度洗脱方式,梯度洗脱方式如下:流动相A的体积分数+流动相B的体积分数=100%;其中: 0-3min流动相A的体积分数由15%下降至0; 3-4min流动相A的体积分数维持在0; 4-4.1min流动相A的体积分数由0%上升至15%; 4.1-5min流动相A的体积分数维持在15%,直至5.2min停止。
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