中科南京生命健康高等研究院;深圳市第三人民医院王桂芹获国家专利权
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龙图腾网获悉中科南京生命健康高等研究院;深圳市第三人民医院申请的专利利用假病毒模型制备高滴度重组流感病毒方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118345053B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310062753.4,技术领域涉及:C12N7/01;该发明授权利用假病毒模型制备高滴度重组流感病毒方法及其应用是由王桂芹;王海坤;常小艳;卢洪洲;张国良;刘冬平设计研发完成,并于2023-01-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本利用假病毒模型制备高滴度重组流感病毒方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了利用假病毒模型制备高滴度重组流感病毒方法及其应用,高滴度的流感病毒制备疫苗可有效的缩短疫苗制备的周期和降低疫苗制备的成本。具体地,本发明提供了将低滴度H5亚型流感病毒改造为高滴度H5亚型流感病毒的方法,在实例中,通过本发明的方法,低滴度的AblackbirdHunan12004的病毒被改造后,其滴度显著提高,免疫原性影响较小。
本发明授权利用假病毒模型制备高滴度重组流感病毒方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种将H5亚型低滴度流感病毒改造为高滴度流感病毒的方法,其特征在于,包括: a提供一构建的H5亚型高滴度流感病毒库和待改造的H5亚型低滴度流感病毒株,基于所述病毒库中的H5亚型高滴度流感病毒和所述H5亚型低滴度流感病毒的HA氨基酸序列,从而获得遗传进化树; b通过所述遗传进化树,获得与所述H5亚型低滴度流感病毒株遗传距离最近的H5亚型高滴度流感病毒株; c将步骤b获得的H5亚型高滴度流感病毒株和H5亚型低滴度流感病毒中的HA或NA蛋白进行互换,制备嵌合假病毒,对所述嵌合假病毒的滴度进行检测,确定影响流感病毒滴度的蛋白是HA还是NA; 其中,如果低滴度病毒株的HA更换为高滴度病毒株的HA后,病毒滴度显著提高,且低滴度病毒株的NA更换为高滴度病毒株的NA后,病毒滴度无显著变化,则可判断影响低滴度病毒株的关键氨基酸不是位于NA而是位于HA;或 如果低滴度病毒株的HA更换为高滴度病毒株的HA后,病毒滴度无变化,但低滴度病毒株的NA更换为高滴度病毒株的NA后,病毒滴度显著提高,则可判断影响低滴度病毒株的关键氨基酸不是位于HA而是位于NA;或 如果低滴度病毒株的HA更换为高滴度病毒株的HA后,病毒滴度显著提高,并且低滴度病毒株的NA更换为高滴度病毒株的NA后,病毒滴度也有显著提高,则可判断影响低滴度病毒株的关键氨基酸同时位于HA和NA; d比较步骤b所获得的H5亚型高滴度流感病毒株和步骤a所述的H5亚型低滴度流感病毒的HA或NA中的氨基酸的差异; e根据步骤c和d的结果,将步骤b所获得的H5亚型高滴度流感病毒的HA或NA中与和步骤a所述的H5亚型低滴度流感病毒株的HA或NA中的全部不同的氨基酸分别进行单点突变,从而制备获得HA或NA突变型流感假病毒; f分别检测步骤e获得的HA或NA突变型流感假病毒和步骤b所获得的H5亚型高滴度流感病毒株的假病毒滴度,从而确定可能影响H5亚型低病毒滴度病毒株的氨基酸位点信息; g根据步骤f获得的氨基酸位点,将待改造的H5亚型低滴度流感病毒的HA或NA中上述关键氨基酸分别进行单位点氨基酸突变制备假病毒,通过滴度检测确定可能提高病毒滴度的氨基酸位点;进一步进行双位点或多位点氨基酸突变,通过假病毒滴度检测,从而确定影响H5亚型低滴度流感病毒的关键氨基酸; (h)根据步骤g确定的关键性氨基酸位点,构建质粒,通过反向遗传,制备HA突变型流感病毒,通过滴度检测,验证确认的关键性氨基酸位点,从而获得H5亚型高滴度流感病毒;以及 (i)对步骤(h)获得的所述H5亚型高滴度流感病毒的吸附能力和融合能力进行检测;和或 (j)对步骤(h)获得的所述H5亚型高滴度流感病毒的免疫原性进行检测,从而获得免疫原性影响小或没有免疫原性影响的H5亚型高滴度流感病毒。
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