中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所);细胞生态海河实验室高瀛岱获国家专利权
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龙图腾网获悉中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所);细胞生态海河实验室申请的专利基于免疫缺陷小鼠移植检测人巨核偏向造血干细胞功能方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115868454B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211668062.0,技术领域涉及:A01K67/0271;该发明授权基于免疫缺陷小鼠移植检测人巨核偏向造血干细胞功能方法是由高瀛岱;李迎辉;杨铭;张文姗设计研发完成,并于2022-12-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于免疫缺陷小鼠移植检测人巨核偏向造血干细胞功能方法在说明书摘要公布了:本发明涉及科研和医疗领域,基于免疫小鼠异种移植的方法,通过免疫学检测的手段对受体小鼠骨髓进行流式检测,同时标记人和小鼠巨核系的表面标记物,排除小鼠巨核系细胞的干扰,能够更为准确判定人巨核系造血的重建水平,为体外评价人造血干细胞巨核重建功能,增加未来应用于临床的治疗成功率建立了准确和可行的方法。
本发明授权基于免疫缺陷小鼠移植检测人巨核偏向造血干细胞功能方法在权利要求书中公布了:1.一种基于免疫小鼠异种移植判断人造血干细胞重建功能的方法,其特征在于,所述方法,包括如下步骤: (1)将待移植的细胞使用无菌PBS缓冲液稀释成合适浓度,按200μL细胞悬液只尾静脉注射到经过120cGy照射的NOG免疫缺陷小鼠; (2)分别于移植后的第4周、第8周、第12周和第16周取10μL尾血流式检测人CD45+植入率; (3)第16周取小鼠骨髓,细胞流式检测鼠CD45-CD41-CD42d-CD61-人CD45-细胞中人CD41a+、CD41a+CD61+CD42b-、CD41a+CD61+CD42b+细胞比例,鼠CD45-人CD45+CD34+CD38+细胞中人CD41a+、CD71+CD110+、CD71-CD110+细胞比例以确定植入造血干细胞功能重建的情况; 所述待移植细胞选自体外培养后的:人骨髓来源单个核细胞,人脐带血来源单个核细胞或人外周血来源单个核细胞; 所述步骤(3)中所述确定植入造血干细胞功能重建的情况的判定流程如下: 1)基于排除人和鼠白细胞的目的选择鼠CD45-人CD45-双阴群; 2)从排除人和鼠白细胞的鼠CD45-人CD45-双阴群中分别划出鼠CD41-CD42d-CD61-排除小鼠巨核细胞群; 3)然后划出人CD41a+或CD41a+CD61+亚群; 4)再在CD41a+CD61+亚群分别划出CD42b-和CD42b+亚群分别代表成熟程度递增的巨核细胞亚群; 5)基于排除鼠白细胞的目的选择鼠CD45-、人CD45+白细胞群; 6)划出人CD34+CD38+祖细胞亚群; 7)然后划出人CD41a+、CD71+CD110+或CD71-CD110+亚群,分别代表巨核系祖细胞和巨核红系祖细胞亚群; 8)统计各细胞剂量移植组巨核细胞重建成功率:若所述4)中代表成熟程度递增的三种表型的巨核细胞CD41a+、CD41a+CD61+CD42b-、CD41a+CD61+CD42b+亚群的流式细胞展现阳性群分群则代表成熟程度递增的巨核细胞亚群重建成功;若所述7)中CD41a+、CD71-CD110+或CD71+CD110+展现阳性群分群,则代表巨核系祖细胞和巨核红系祖细胞亚群重建成功; 所述方法为非治疗目的的。
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