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龙图腾网获悉华子昂;万君兴;竹添申请的专利增强血管内皮细胞表达P选择素的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN109280682B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201811007661.1，技术领域涉及：C12P21/00；该发明授权增强血管内皮细胞表达P选择素的方法是由华子昂设计研发完成，并于2018-08-31向国家知识产权局提交的专利申请。

本增强血管内皮细胞表达P选择素的方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，其中，包括以下步骤：1设置冲击波设备作用模式及作用参数包括：压强、频率、频次；2准备继代培养的血管内皮细胞或实验小鼠体内血管内皮细胞，离心后，用10％的完全培养液重悬移植到培养皿中，再利用探头对细胞进行冲击波处理；3完成冲击波处理后，继续培养60小时，再分离血管内皮细胞利用荧光定量PCR方法检测P‑选择素基因表达量，以GAPDH基因为参考内标。本发明通过冲击波增强血管内皮细胞的P选择素表达，不需要其他药物或化学品刺激，操作简便、效果显著，尤其是在活体内的血管内皮P选择素表达上有绝对优势，是未来干细胞归巢及干细胞相关技术的发展基础。

本发明授权增强血管内皮细胞表达P选择素的方法在权利要求书中公布了：1.一种增强血管内皮细胞表达P选择素的方法，包括以下步骤： 步骤1：设置冲击波设备作用模式及作用参数，包括：压强、频率、频次； 步骤2：准备继代培养的血管内皮细胞或实验小鼠体内血管内皮细胞，离心后，用10％的完全培养液重悬移植到培养皿中，再利用探头对细胞进行冲击波处理； 步骤3：完成冲击波处理后，继续培养，再分离血管内皮细胞利用荧光定量PCR方法检测P-选择素基因表达量，以GAPDH基因为参考内标； 步骤2中，所述的继代培养的血管内皮细胞制备方法为：从液氮中取出原代人心脏微血管内皮细胞冻存管，37℃水浴箱融化，传至已左旋多聚赖氨酸包被的培养瓶中，放入一定适量的内皮细胞培养基，在37℃、5％二氧化碳培养箱中培养，2～3d换液，4～5d传代1次，用胰酶消化细胞，实验采用第5代细胞；所述原代人心脏微血管内皮细胞能够选用活体内的血管内皮细胞； 步骤1中，所述的冲击波参数范围为压力1.5-3.0bar、频率8-12Hz、频次为200次； 步骤3中，采用相对定量的方法对选择素基因表达水平进行计算，采用目的基因与内参基因之间Ct值之间的差异来确定目的基因的表达量，以GAPDH作为内参基因，每个RNA样品的定量PCR进行三个重复以消除系统误差；步骤3中，采用的荧光定量PCR方法检测为：用HighPureRNAIsolationKit提取总RNA，采用TaqManReverseTranscriptionRengents试剂盒将总RNA反转录为cDNA，取反转录产物cDNA模板2.5μL，按照TaqManGeneExpressionMasterMix说明书进行定量PCR检测；步骤3中，所述继续培养的时间为60小时。

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