中国科学院海洋研究所张国范获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院海洋研究所申请的专利一种筛选高糖原含量长牡蛎亲贝的方法及其相关的SNP引物对获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN107475415B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:201710855508.3,技术领域涉及:C12Q1/6858;该发明授权一种筛选高糖原含量长牡蛎亲贝的方法及其相关的SNP引物对是由张国范;李莉;孟杰;宋凯;李春燕;刘圣;史瑞辉;刘优丽设计研发完成,并于2017-09-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种筛选高糖原含量长牡蛎亲贝的方法及其相关的SNP引物对在说明书摘要公布了:本发明涉及一种筛选高糖原含量长牡蛎亲贝的方法及其相关的SNP引物对。通过486个个体的全基因组关联分析,鉴定出位于长牡蛎6号染色体上的67个与糖原含量显著相关的SNP信号。针对该区域scaffold1243_53489碱基处的1个SNP位点,开发了其相应的检测方法,结果表明利用该方法可以简单迅速检测该SNP位点。同时该位点CC基因型个体相比较于TT基因型个体。筛选CC基因型的亲贝,指导牡蛎育种。所述长牡蛎该位点上下游500kb的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明有益效果在于苗种繁育前对亲贝进行基因型鉴定,提高子代糖原含量。本研究结果获得SNP标记可信度更高,效果更稳定。
本发明授权一种筛选高糖原含量长牡蛎亲贝的方法及其相关的SNP引物对在权利要求书中公布了:1.一种判断长牡蛎SNP标记基因型的方法,其特征在于: SNP引物对: 正向引物为F:5’-TAGTATTAAGGCACATGCCG-3’; 反向引物为R:5’-ATGATGTTTACTTGTTTGCTTG-3’。 通过全基因组关联分析获得一个SNP标记,其位于长牡蛎基因组scaffold1243_53,489kb碱基处;该位点存在T和C两个碱基形式,在苗种繁育前对亲贝进行该SNP标记位点基因型鉴定,不同基因型糖原含量的顺序为CCTCTT,通过筛选该位点CC基因型的亲贝,提高后代群体的糖原含量, 包括步骤如下: 1所述长牡蛎基因组的提取,具体为提取长牡蛎基因组DNA,使用灭菌水或TE缓冲液稀释到10-20nguL; 2所述长牡蛎基因组DNA为模板,配制反应体系:基因组DNA1uL,通用PCRmix5uL,引物F和R各0.2uL,灭菌双蒸水3.6uL;所述反应体系可同比放大; 3PCR扩增的反应程序为: 35-55个循环可根据需要选择循环数 4所述的PCR反应结束后,加入饱和荧光染料Lcgreen及内标各1uL,经过95℃-98℃退火5-10min; 5退火后自然降温至室温,进行高分辨率熔解曲线分析,鉴定待测样 a利用内标的熔解曲线对所有待测样本的熔解曲线进行校正; b对校正后的所有待测样本熔解曲线进行分群,当熔解曲线求导后为单峰且峰值对应横坐标温度大于77.5℃时SNP基因型为CC,当熔解曲线求导后为单峰且峰值对应横坐标温度小于77.5℃时SNP基因型为TT,当熔解曲线求导后为双峰时SNP基因型为TC。 c判断每个待测样本所述长牡蛎SNP标记基因型。 所述步骤5中,内标为等量混合的高温内标和低温内标,即两条具有不同GC含量的双链寡核苷酸,高、低温内标终浓度分别为2.5μM; SNP基因型鉴定时所需的高、低内标序列,其中, 高温内标序列为: 低温内标序列为:
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