广西壮族自治区林业科学研究院陈晓明获国家专利权
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龙图腾网获悉广西壮族自治区林业科学研究院申请的专利一种离体保存杉木种质资源的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117322336B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311535575.9,技术领域涉及:A01H4/00;该发明授权一种离体保存杉木种质资源的方法是由陈晓明;程琳;黄开勇;蓝肖;向绣立;陈琴;戴俊;陈仕昌;陆冬妙设计研发完成,并于2023-11-17向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种离体保存杉木种质资源的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种离体保存杉木种质资源的方法,包括保存材料的获取,外植体无菌化处理,诱导培养和离体保存的工序,选择8年生以上健康的杉木植株作为母树,对母树进行环割促萌以获得萌芽条作为外植体,对外植体进行无菌化处理后依次诱导获取无菌芽和丛生芽,选择单芽保存于藻酸凝胶物中实现离体保存。本发明改变了传统杉木保存方式,把保存地点从田间保存变为实验室室内保存,所用的空间大大减少;无须大量的人力和物力的管理和维护,种质资源保存操作简单方便,因此节省了大量的人力、物力及林地资源;可为科学研究提供大量整齐一致的理想试材,有利于控制试验误差,获得理想的试验结果。
本发明授权一种离体保存杉木种质资源的方法在权利要求书中公布了:1.一种离体保存杉木种质资源的方法,其特征在于,包括保存材料的获取,外植体无菌化处理,诱导培养和离体保存的工序,选择8年生以上健康的杉木植株作为母树,对母树进行环割促萌以获得萌芽条作为外植体,对外植体进行无菌化处理后依次诱导获取无菌芽和丛生芽,选择单芽保存于藻酸凝胶物中实现离体保存;主要操作步骤如下: (1)保存材料的获取:选择8年生以上健康的杉木植株作为母树,在离地8~12cm处对母树进行环割,环割母树树周长的12,宽3~5cm,割伤至韧皮部,环割后喷施浓度为20~50mg·L-1的6-BA溶液诱导芽萌发;待萌芽条生长至10~20cm时采集萌芽条作为外植体; (2)外植体无菌化处理:将采集获取的外植体去除针叶后,剪成3~4cm长的茎段,用洗洁精漂洗5~10min,然后置于流水下冲洗1h,最后用滤纸吸干水分;然后置于超净工作台上,采用75%酒精对茎段浸泡50s,无菌水冲洗1次后转入0.15%升汞溶液中浸泡6~10min进行灭菌处理;无菌水冲洗5次后接种于改良MS+6-BA0.8mg·L-1+蔗糖30000mg•L-1+琼脂3000mg•L-1的培养基Ⅰ中,每瓶接种1个茎段,接种后,置于培养室中进行培养获取无菌芽; (3)诱导培养:将步骤(2)处理得到的无菌芽接种于改良MS+6-BA0.4mg·L-1+NAA0.03mg·L-1+蔗糖30000mg•L-1+琼脂3000mg•L-1的培养基Ⅱ中诱导杉木丛生芽发生; (4)离体保存:从步骤(3)诱导培养杉木丛生芽选择长1.5~2cm的单芽浸没到30g•L-1海藻酸钠溶液中,然后将含有杉木单芽的海藻酸钠溶液转移到浓度为30g•L-1的CaCl2溶液中浸泡,5min后海藻酸钠溶液在CaCl2溶液中形成藻酸凝胶物,杉木单芽被包埋其中,形成圆形小球;将圆形小球用无菌水冲洗3次后,放置到改良MS+6-BA0.2mg·L-1+NAA0.03mg·L-1+蔗糖30000mg•L-1+琼脂3000mg•L-1的培养基Ⅲ中进行离体保存;离体保存的时间最长为12个月; 步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)所述的改良MS的原料组分和质量含量为:KNO31450mg·L-1;NH4NO3700mg·L-1;CaCl2400mg·L-1;MgSO4.7H2O450mg·L-1;CaNO32.4H2O80mg•L-1;KH2PO3200mg•L-1;MnSO4.4H2O22.3mg•L-1;ZnSO4.7H2O12.0mg•L-1;CuSO4.5H2O0.025mg•L-1;H3BO36.2mg•L-1;Na2MoO4.2H2O0.25mg•L-1;KI0.95mg•L-1;CoCl2.6H2O0.025mg•L-1;Na2•EDTA37.3mg•L-1;FeSO4.7H2O27.8mg•L-1;维生素B11.0mg•L-1;维生素B60.5mg•L-1;烟酸0.5mg•L-1;甘氨酸2.0mg•L-1;肌醇100mg•L-1。
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