中国农业科学院郑州果树研究所李玉阔获国家专利权
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龙图腾网获悉中国农业科学院郑州果树研究所申请的专利用于鉴定软枣猕猴桃果实颜色的分子标记、引物及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116837127B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310430859.5,技术领域涉及:C12Q1/6895;该发明授权用于鉴定软枣猕猴桃果实颜色的分子标记、引物及其应用是由李玉阔;方金豹;齐秀娟;林苗苗;孙雷明;王然;顾红设计研发完成,并于2023-04-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于鉴定软枣猕猴桃果实颜色的分子标记、引物及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于鉴定软枣猕猴桃果实颜色的分子标记、引物及其应用,本发明分子标记位于软枣猕猴桃AaLDOX基因启动子区域起始密码子上游‑495bp处,为一个29bp的Indel变异。利用本发明分子标记及方法,通过常规分子试验检测即可在软枣猕猴桃童期快速准确地鉴定出果实颜色,高效区分红绿软枣猕猴桃种质资源,可用于亲本选择和后代的苗期鉴定,大大提高选择育种的效率和准确性。本发明方法在植物的各个组织、器官以及各发育阶段都能进行检测,且具有方便快捷、特异性好、准确性高,不受气候环境影响等优点,可应用于红色软枣猕猴桃的精准、定向、高效育种,具有较大的应用价值。
本发明授权用于鉴定软枣猕猴桃果实颜色的分子标记、引物及其应用在权利要求书中公布了:1.一种鉴定软枣猕猴桃果实颜色的分子标记检测方法,其特征在于,所述分子标记位于软枣猕猴桃AaLDOX基因启动子区域起始密码子上游-495bp处,为一个29bp的Indel变异,其序列如SEQIDNO:6所示; 所述方法包括以下步骤: (1)DNA提取 利用基因组DNA提取试剂盒提取软枣猕猴桃新鲜叶片中的基因组DNA; (2)PCR扩增 a.反应体系包括: 基因组DNA模板,1μL, 2×T5SuperMix(PAGE),12.5μL, 上游引物,F-GGCCTTTTCATGGCCTTATATAA,1μL, 下游引物,R-GCTAGTTGGGTATATCGGTACCAA,1μL, 无菌水,9.5μL; b.反应程序为: 预变性94℃,3min, 变性94℃,30s、退火58℃,30s、延伸72℃,30s,共35个循环, 终延伸72℃,10min, PCR扩增程序结束后,置于4℃环境中保存; (3)电泳图谱分析 使用聚丙烯酰胺凝胶电泳对PCR扩增得到的目标条带进行分析,所述聚丙烯酰胺凝胶电泳的大板胶材料及用量为:水61.4mL、30%制胶液28mL、10×TBE液10mL、TEMED促凝胶剂66μL、10%APS700μL;每个孔的上样量为1.2μL,电泳时设置为恒压160V,电泳时长2小时10分钟;使用的Marker为600bp,从下至上依次为50、100、150、200、300、400、500、600bp;银染显色的步骤包括:使用500mL水固定5s,然后用500mL0.2%硝酸银水溶液渗透8min,再使用500mL水漂洗2次,每次漂洗1min,最后使用500mL水+8g氢氧化钠+4mL甲醛溶液显色至条带清晰,鉴定结果纯合为红色软枣猕猴桃,杂合为绿色软枣猕猴桃。
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