中国农业科学院深圳农业基因组研究所常玉晓获国家专利权
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龙图腾网获悉中国农业科学院深圳农业基因组研究所申请的专利同时进行前景DNA分子标记和背景DNA分子标记检测的方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115261450B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202110487887.1,技术领域涉及:C12Q1/6858;该发明授权同时进行前景DNA分子标记和背景DNA分子标记检测的方法及其应用是由常玉晓;张鹏;张翠翠;邱先进;王悦;王重荣;赵胜设计研发完成,并于2021-04-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本同时进行前景DNA分子标记和背景DNA分子标记检测的方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种同时进行前景DNA分子标记和背景DNA分子标记检测的方法及其应用,涉及基因工程的技术领域。本发明将引物‑模板完全匹配引发的特异性扩增作为前景标记,同时,本发明克服了技术偏见,将引物‑模板不完全匹配引发的非特异性扩增作为全基因组背景标记筛选,实现了同时进行前景标记筛选和背景标记筛选,不仅提高了检测的效率,也提高了检测的准确性,简化了实验流程,降低了成本,具有重要的应用价值。
本发明授权同时进行前景DNA分子标记和背景DNA分子标记检测的方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种同时进行前景DNA分子标记和背景DNA分子标记FBI-seq检测的方法,其特征在于,包括以下步骤: a根据样品基因组序列设计目的基因的PCR引物FBI-SP,并在引物的5’端添加用于高通量测序的DNA元件; b打断样品基因组DNA,并在DNA片段末端添加DNA接头; c利用FBI-SP引物进行PCR扩增,包括第一轮PCR反应和第二轮PCR反应,扩增过程中同时存在FBI-SP引物与模板完全匹配和不完全匹配引发的扩增产物; 第一轮PCR反应:以primer2与FBI-SP为引物进行扩增,扩增过程中同时存在FBI-SP引物与模板完全匹配和不完全匹配引发的扩增;富集获得完全匹配的含有目标基因的DNA片段,以及不完全匹配引发的扩增DNA片段,得到第一轮PCR产物;所述primer2结合DNA接头; 第二轮PCR反应:以第一轮PCR产物为模板,利用引物primer1和引物PPMi7进行PCR扩增,目的PCR产物片段的两端被加上测序平台测序时所需的接头序列;所述primer1结合FBI-SP引物的5’端;PPMi7结合primer2的5’端; 所述primer2的5’端为PPMi7序列,中间为index序列,3’端为DNA接头的互补序列; 所述primer1的5’端为PPMi5序列,中间为index序列,3’端为FBI-SP引物5’端的互补序列; 所述index序列为6-10个随机碱基N; dPCR产物测序后统计数据分析,数据分析包括引物-模板完全匹配和不完全匹配扩增得到的遗传信息。
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