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龙图腾网获悉博铼生技股份有限公司申请的专利用于DNA突变的多重检测的图像差异多重测定获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN110382711B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201780076075.X，技术领域涉及：C12Q1/6827；该发明授权用于DNA突变的多重检测的图像差异多重测定是由曹汀;黄勤修;胡贤彬设计研发完成，并于2017-12-11向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于DNA突变的多重检测的图像差异多重测定在说明书摘要公布了：本文提供了用于检测KRAS、BRAF、CTNNB1和APC基因中的DNA突变的存在的方法和试剂盒。所述方法和试剂盒采用微载体，所述微载体中的每一种具有对KRAS、BRAF、CTNNB1或APC基因中的DNA突变具有特异性的探针和所述探针序列所特有的标识符。在从样品中分离和扩增DNA后，扩增的DNA与偶联至微载体的对DNA突变具有特异性的探针杂交表明样品中存在DNA突变。由于可通过检测标识符来鉴定每一种微载体，因此提供了用于KRAS、BRAF、CTNNB1和APC基因中的每一种中的多个突变的多重筛选测定。

本发明授权用于DNA突变的多重检测的图像差异多重测定在权利要求书中公布了：1.试剂在制备用于检测和基因中的DNA突变的存在的方法中的试剂盒的用途，其中所述试剂包含对人 和基因中的每一种中的一个或多个DNA突变的基因座具有特异性的引物对、至少四种阻断核酸和至少四种探针，所述方法包括： a从样品中分离DNA； b在存在所述至少四种阻断核酸的情况下使用所述对人 和基因中的每一种中的一个或多个DNA突变的基因座具有特异性的引物对，通过聚合酶链反应PCR扩增来自a的分离的DNA，其中所述至少四种阻断核酸中的每一种与对应于所述或基因中的所述DNA突变中的一种的野生型DNA基因座杂交，并阻止所述野生型DNA基因座的扩增；其中所述至少四种阻断核酸中的每一种包含与所述对应于所述或基因中的所述DNA突变中的一种的野生型DNA基因座杂交的单链寡核苷酸、阻断所述单链寡核苷酸延伸的3'末端部分和一个或多个锁核酸LNA； c使所述扩增的DNA与所述至少四种探针杂交，所述至少四种探针包括一种或多种对所述和基因中的每一种中的DNA突变具有特异性的探针，其中所述至少四种探针中的每一种偶联至微载体，并且其中所述微载体中的每一种包含对应于与其偶联的所述探针的标识符； d检测所述扩增的DNA与所述至少四种探针的杂交的存在或不存在，其中所述扩增的DNA与所述探针之一之间的杂交表明存在对应于所述探针的所述DNA突变； e检测所述微载体的标识符；以及 f使检测到的所述微载体的标识符与检测到的所述扩增的DNA与所述微载体的相应探针的杂交的存在或不存在相关联； 其中： 1所述基因中的一个或多个DNA突变包括编码G12D、G12V、G12S或G13D突变的KRAS蛋白的一个或多个DNA突变，其中步骤b包括使用包含序列GTACTGGTGGAGTATTTGATAGTGSEQIDNO:1和ATCGTCAAGGCACTCTTGCCTACSEQIDNO:2的引物对以及在包含的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，通过PCR扩增所述分离的DNA，且所述至少四种探针包含一种或多种包含选自由以下组成的组的序列的探针： TTTTTTTTTTTTAAGGAGCTGATGGSEQIDNO:47、 TTTTTTTTTTTTAAGGAGCTGTTGGSEQIDNO:48、 TTTTTTTTTTTATGGAGCTAGTGGSEQIDNO:49、 TTTTTTTTTTTTAAGGAGCTAGTGGSEQIDNO:86、 TTTTTTTTTATGGAGCTGGTGACGTSEQIDNO:50和 TTTTTTTTTAAGGAGCTGGTGACGTSEQIDNO:91； 2所述基因中的一个或多个DNA突变包括一个或多个编码V600E突变的BRAF蛋白的基因，其中步骤b包括使用包含序列GGACCCACTCCATCGAGATTTSEQIDNO:8和CAGATATATTTCTTCATGAAGACCTCACAGTAASEQIDNO:9的引物对以及在包含SEQIDNO:10的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，通过PCR扩增所述分离的DNA，且所述至少四种探针包含一种或多种包含选自由以下组成的组的序列的探针： TTTTTTAATTTCTAGCTACAGAGAAATSEQIDNO:51、 TTTTTTTAATTACTAGCTACAGAGAAASEQIDNO:95、 TTTTTTTATGTCTAGCTACAGAAAAATSEQIDNO:52和 TTTTTTTATTTCTAGCTACAGAAAAATSEQIDNO:99； 3所述基因中的一个或多个DNA突变包括编码T41A、T41I、S45F和S45P突变的CTNNB1蛋白的一个或多个突变，其中步骤b包括使用包含序列GGAATCCATTCTGGTGCCACTSEQIDNO:13和AGAAAATCCCTGTTCCCACTCATASEQIDNO:14的引物对以及在包含SEQIDNO:15的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，或使用包含序列GGTGCCACTACCACAGCTCCTSEQIDNO:18和TCTCAAAACTGCATTCTGACTTTCASEQIDNO:19的引物对以及在包含SEQIDNO:20的序列的阻断核酸的 存在下，通过PCR扩增所述分离的DNA，且所述至少四种探针包含一种或多种包含选自由以下组成的组的序列的探针： TTTTTTTTTTTAGGAGCTGTGGCAGSEQIDNO:53、 TTTTTTTTTTAAGGAGCTGTGGCAGSEQIDNO:104、 TTTTTTTTTTTTTGGAGCTGTGATASEQIDNO:54、 TTTTTTTTTTTTTTGGAGCTGTGATSEQIDNO:109、 TTTTTTTTTTTACCACTCAGAAAAGSEQIDNO:55、 TTTTTTTTATTACCACTCAGAAAAGSEQIDNO:113 TTTTTTTTTAATACCACTCAGAGGAGSEQIDNO:56和 TTTTTTTTTATTACCAATCAGAGGAGGSEQIDNO:119；并且 3所述基因中的一个或多个DNA突变包括编码Q1367*、R1450*、E1309移码、S1465移码和T1556移码突变的APC蛋白的一个或多个突变，其中步骤b包括使用包含序列TAAAAATAAAGCACCTACTGCTGAAASEQIDNO:23和AGCTTGCTTAGGTCCACTCTCTCTSEQIDNO:24的引物对以及在包含SEQIDNO:25的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，或使用包含序列TAGGATGTAATCAGACGACACAGGASEQIDNO:27和CAGCTGACCTAGTTCCAATCTTTTASEQIDNO:28的引物对以及在包含SEQIDNO:29的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，或使用包含序列TCTCCCTCCAAAAGTGGTGCTSEQIDNO:31和TGGCAATCGAACGACTCTCAASEQIDNO:32的引物对以及在包含SEQIDNO:33的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，或使用包含序列GCAGAAGTAAAACACCTCCACCASEQIDNO:35和GGTGCTTTATTTTTAGGTACTTCSEQIDNO:36的引物对以及在包含SEQIDNO:37的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，或使用包含序列CAGGAAAATGACAATGGGAATGSEQIDNO:39和ATCTAATAGGTCCTTTTCAGAATCAATAGSEQIDNO:40的引物对以及在包含SEQIDNO:41的序列的阻断核酸的存在下，其中斜体的核酸表示锁核酸，通过PCR扩增所述分离的DNA，且所述至少四种探针包含一种或多种包含选自由以下组成的组的序列的探针： TTTTTTTTTTTTTGAAATAAAAGATTGGSEQIDNO:58、 TTTTTTTTTTTTTAGAAATAAAAGATTGSEQIDNO:122、 TTTTTTTTTTTTTGGGTGTCTAAGSEQIDNO:59、 TTTTTTGGGTGTCTAAGCACCACTSEQIDNO:126、 TTTTTTTTTACAAACCAAGTGAGAASEQIDNO:60、 TTTTTTTTACTGCTGAAAAGAGAGAGTSEQIDNO:57和 TTTTTTTTTTAGAGGCAGAAAAAAACTSEQIDNO:61。

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