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龙图腾网获悉甘肃农业大学申请的专利一种铱配合物对FGF21蛋白功能影响的实验方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119619093B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411780908.9，技术领域涉及：G01N21/64；该发明授权一种铱配合物对FGF21蛋白功能影响的实验方法是由郜原;张丽丽;杜少博;嵇旺晔;赵淑琴;茹嘉喜设计研发完成，并于2024-12-05向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种铱配合物对FGF21蛋白功能影响的实验方法在说明书摘要公布了：本发明属于铱配合物领域，尤其是一种铱配合物对FGF21蛋白功能影响的实验方法，包括以下步骤：S1：铱配合物、蛋白、细胞和试剂准备：铱配合物IrCN、FGF21蛋白、小鼠肾成纤维细胞BHK21和牛乳腺上皮细胞MAC‑T；S2：铱配合物与蛋白的结合特征:铱配合物用二甲基亚砜溶解，配制成浓度为10mgml的母液，而后用PBS缓冲液梯度稀释母液，使铱配合物终浓度为0.05、0.1、0.5、1mgml，将不同浓度的铱配合物加入20μg带有His标签的骆驼FGF21蛋白。本发明能够对铱配合物与骆驼FGF21蛋白结合、铱配合物与FGF21蛋白结合特异性、铱配合物的细胞毒性进行高效的验证。

本发明授权一种铱配合物对FGF21蛋白功能影响的实验方法在权利要求书中公布了：1.一种铱配合物对FGF21蛋白功能影响的实验方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：铱配合物、蛋白、细胞和试剂准备：铱配合物IrCN、FGF21蛋白、小鼠肾成纤维细胞BHK21和牛乳腺上皮细胞MAC‑T； S2：铱配合物与蛋白的结合特征:铱配合物用二甲基亚砜溶解，配制成浓度为10mgml的母液，而后用PBS缓冲液梯度稀释母液，使铱配合物终浓度为0.05、0.1、0.5、1mgml，将不同浓度的铱配合物加入20μg带有His标签的骆驼FGF21蛋白，通过化学发光成像系统记录不同时间的荧光强度变化，采用ImageJ软件进行荧光强度分析； S3：铱配合物与FGF21蛋白结合特异性：标记与混合，将铱配合物探针标记的FGF21蛋白与含组氨酸的血清白蛋白混合，设置不同的铱配合物与FGF21蛋白浓度比分别为1：100、1： 200、1：300、1：400以及不同的BSA与FGF21蛋白量的比例关系； 凝胶电泳与检测：于24h后进行凝胶电泳分离，用化学发光成像系统检测BSA是否出现荧光，通过对不同泳道结果的分析，确定铱配合物与FGF21蛋白结合特异性规律； S4：铱配合物的细胞毒性测试：细胞接种与处理：在37℃，5％CO2条件下，将可传代细胞接种于96孔细胞培养板中，待细胞生长至密度85%左右时，移去孔中培养基，加入提前配制好的含不同浓度铱配合物探针的培养基溶液，使铱配合物探针终浓度分别为0、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mgml，同时设置对照组，每组设3组平行实验，毒性检测：与细胞共培养24h后，每孔加入10μlCCK8溶液，培养箱继续孵育2h，用酶标仪测定450nm波长处每个孔中溶液吸光度值，根据吸光度值计算细胞存活率，以评估铱配合物对细胞活力的影响； S5：铱配合物探针的溶血活性测定：取健康小鼠血液，加入10倍量的0.9％氯化钠溶液，离心洗涤，除去上清，将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液制成4%的混悬液；制备样本溶液于离心管中，设置阳性、阴性对照，各管加入200μl红细胞悬液，1000g离心3min，肉眼观察溶血现象，吸取100μL上清液至新96孔板中，检测OD540nm； S6：活细胞成像测试：将BHK21细胞接种于共聚焦小皿中，待皿内细胞生长至密度50%左右时，将不同浓度的铱配合物探针IrCN溶液加入到小皿中，与细胞共培养10min后，用磷酸盐缓冲液清洗两遍，直接用于显影； S7：免疫荧光实验：将BHK21细胞接种于共聚焦小皿中，待皿内细胞生长至密度50％左右时，用预冷PBS洗涤两次，在室温下用4%多聚甲醛固定30分钟，PBS洗涤3次后，细胞在0.2%TritonX‑100中通透10分钟，用PBS洗涤3次后，用40,6‑二氨基苯基吲哚染色10分钟，PBS洗涤三次后，加入不同浓度的铱配合物探针IrCN于小皿中，使用激光共聚焦显微镜捕获并记录图像； S8：RNA提取与cDNA合成：采用TRIzol法从骆驼成纤维细胞中提取总RNA，按照PrimeScriptRTReagentKit说明书合成cDNA，用紫外分光光度计检测cDNA的浓度和纯度； S9：蛋白提取与浓度测定：用RIPA蛋白裂解缓冲液提取细胞总蛋白，用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度，等量总蛋白经12%SDS‑PAGE凝胶电泳分离，然后电转移到0.45µm聚偏二氟乙烯膜上，用封闭液封闭20分钟，然后用抗tubulin抗体、抗PI3K抗体、抗AKT抗体和抗mTOR抗体在4℃孵育过夜，PBS洗涤3次后，与酶标山羊抗兔IgG室温共孵育2h，最后，使用ECL化学发光检测法可视化蛋白质条带，并通过凝胶成像系统捕获； S10、统计分析：使用GraphPadPrism软件对结果进行分析，数据以平均值±SEM表示，UnpairedStudent’st检验用于两组间的比较，多个海马测量组采用双因素方差分析，P 0.05为有统计学意义。

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