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龙图腾网获悉中国医学科学院病原生物学研究所申请的专利一种淋病奈瑟菌耐药位点多重检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN111394438B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202010060466.6，技术领域涉及：C12Q1/6858；该发明授权一种淋病奈瑟菌耐药位点多重检测方法是由彭俊平;郭军华;李雅梅设计研发完成，并于2020-01-19向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种淋病奈瑟菌耐药位点多重检测方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种检测检测19个淋病奈瑟菌耐药位点突变的方法。该方法利用多重PCR‑质谱法检测19个淋病奈瑟菌耐药位点突变。本发明的检测方法，包括以下步骤：1针对不同耐药位点的引物设计；2多重PCR扩增反应；3虾碱性磷酸酶处理；4单碱基延伸反应；5树脂脱盐纯化；6质谱检测。

本发明授权一种淋病奈瑟菌耐药位点多重检测方法在权利要求书中公布了：1.一种淋病奈瑟菌耐药位点多重检测方法，该方法用于非诊断目的，其特征在于，包括以下步骤： 1引物设计：针对每一种拟检测耐药位点，首先从GenBank数据库中下载各淋病奈瑟菌经过完整注释作为参考序列的代表株9个耐药基因序列，包括rpsE、penA、gyrA、parC、ponA、porB、mtrR、16SrRNA和23SrRNA，将参考序列提交到NCBI的进行核酸序列BLAST，选择nr数据库，下载比对得到的结果，得到19个检测淋病奈瑟菌耐药位点突变所在的靶基因序列，针对每个靶基因中的待测耐药位点设计特异性扩增引物； 2多重PCR扩增反应：将UNG酶、dNuTPs混合物、DNA聚合酶和多重PCR引物一同加入PCR反应体系中混匀，先使用UNG酶进行dUTP的消化，降解PCR扩增产物，然后灭活UNG酶，预变性，随后作PCR扩增，获得待测样本中靶基因扩增产物； 3虾碱性磷酸酶反应：多重PCR反应结束后，加入SAP混合液，使用SAP消化去除反应体系剩余的dNuTPs，预防多余的底物影响下一步单碱基延伸反应结果； 4单碱基延伸反应：加入针对耐药位点设计的延伸探针，结合至扩增出来的靶基因进行单碱基延伸反应，底物为经过修饰的双脱氧三磷酸核苷，使得延伸探针在特定的单核苷酸位点处延伸一个碱基后终止反应； 5树脂脱盐：采用阳离子交换树脂吸附体系中的盐离子，纯化延伸反应产物； 6质谱检测：纯化后产物采用全自动点样装置点到芯片，进行分子量检测，根据分子量差异确定待测靶基因上耐药位点的基因型； 其中，步骤1中，为了避免扩增引物的质量出现在结果窗口，须在每条扩增引物的5’端加上通用序列ACGTTGGATG10个碱基的增加质量，在扩增区中的耐药位点所在区域设计一条单碱基延伸探针，使该探针结合到靶基因上后，在3’末端只允许延伸一个经设计确定的碱基，作为该基因型特异性序列标记， 其中，19个耐药位点突变包括： 116SrRNAC1192U 2rpsET24P 323SrRNAC2611T 423SrRNAA2059G 5gyrAD95GA 6gyrAS91F 7parCD86N 8parCS88P 9penAG542S 10penAG545S 11penAA501TV 12penAP551SL 13penAA311V 14penAD345-insertion 15ponAL421P 16mtrR-G45D 17mtrR-deletionA 18porB-A121DNG 19porBG120DKNR； 所述19个耐药位点的扩增引物和延伸探针序列见表1。

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