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龙图腾网获悉中国计量大学申请的专利基于PfAgo的双生病毒双重检测试纸条及其制备方法、应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119757736B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411676965.2，技术领域涉及：G01N33/569；该发明授权基于PfAgo的双生病毒双重检测试纸条及其制备方法、应用是由孙凯;刘妍;申屠旭萍;叶子弘;俞晓平设计研发完成，并于2024-11-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于PfAgo的双生病毒双重检测试纸条及其制备方法、应用在说明书摘要公布了：基于PfAgo的双生病毒双重检测试纸条及其制备方法、应用，属于病毒检测技术领域。本发明一方面提供了基于PfAgo的双生病毒双重检测试纸条及其构建方法，另一方面提供了该试纸条在TYLCCNV和PaLCuCNV病毒检测中的应用。本发明利用PfAgo酶识别和切割含尿嘧啶DNA的能力，创新性地开发了ULPD防污染检测系统。该系统结合了dUTP‑LAMP技术用于靶标富集，并通过设计的gDNA和免疫胶体金试纸条实现快速诊断。

本发明授权基于PfAgo的双生病毒双重检测试纸条及其制备方法、应用在权利要求书中公布了：1.利用试纸条进行TYLCCNV和PaLCuCNV病毒检测的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1对待测样品进行DNA提取； S2采用UDG-LAMP扩增体系对待测样品进行扩增，所述UDG-LAMP扩增体系包括10×IsothermalAmplificationBuffer、dNTPs、MgSO4、用于TYLCCNV病毒特异性扩增的引物、用于PaLCuCNV病毒特异性扩增的引物、DNATemplate、Bstt2.0、UDG酶和超纯水； S3建立包括引导PfAgo蛋白进行靶向性切割的gDNA、PfAgo蛋白、探针、MnCl2和LAMP扩增产物的PfAgo体系，进行反应； S4反应结束后，对上述PfAgo体系进行采用试纸条进行检测； 所述试纸条通过以下步骤构建得到： 1制备胶体金液体 2制备金标抗体 取1mL胶体金溶液，按0.2MK2CO3溶液添加量5µL、兔抗FAM抗体量4µg的添加量添加K2CO3溶液和兔抗FAM抗体，按0.2MK2CO3溶液添加量5µL、鼠抗Dig抗体量5µg的添加量添加K2CO3溶液和鼠抗Dig抗体，缓慢混合以确保充分结合；加入总体积200µL的10%BSA，缓慢混合封闭未结合的位点；随后，冷冻离心；移除上清液后，向剩余的沉淀中加入200μL工作复溶液，以重悬胶体金颗粒，制备的金标抗体储存于4℃备用； 3胶体金试纸条的组装 a剪切合适大小的NC膜，平贴在PVC底板上，确保表面清洁无污染； b对齐并放置金标垫于NC膜上，间距2mm，在NC膜上方放置剪裁好的样品垫，NC膜另一端放置吸水纸，形成紧密结构； c使用0.1μgμL羊抗鼠抗体和0.1μgμL羊抗兔抗体作为检测线，即T1和T2线，0.2μgμL链霉亲和素作为质控线，即C线，以5μLcm速度划线，确保两线之间保持5mm以上的间隔； d划线完成后，将NC膜置于37℃环境下干燥16h后备用； e将金标抗体以2μLcm的量均匀喷涂在玻璃纤维膜上，形成金标垫，并在37℃干燥30min后备用； f将样品垫浸泡在活化复溶液中2h，随后在37℃下干燥2h； g以4mm宽度使用切纸机精确剪裁试纸条，剪裁后，将试纸条密封并置于干燥环境中。

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