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龙图腾网获悉浙江工业大学申请的专利一种稳定高产D-泛酸的工程菌及其构建方法与应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119859602B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-31发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510109454.0，技术领域涉及：C12N1/21；该发明授权一种稳定高产D-泛酸的工程菌及其构建方法与应用是由柳志强;郑慧慧;周俊平;王怡濛;欧阳水平;郑裕国设计研发完成，并于2025-01-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种稳定高产D-泛酸的工程菌及其构建方法与应用在说明书摘要公布了：本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种稳定高产D‑泛酸的工程菌及其构建方法与应用。本发明通过代谢工程技术，改造其代谢途径中的关键基因，具体地，通过增强ysaA基因的表达，修饰亚甲基四氢叶酸MTF生物合成途径提高MTF的水平可导致泛酸生物合成途径关键中间体酮泛解酸水平的提高，从而提高D‑泛酸的产量。同时，将基因组中产芽孢的spoIVB或和spoIIIE基因敲除，减少芽孢形成的能量消耗和物质浪费，促进次生代谢产物的生成，进而增加D‑泛酸的合成；另外，敲除基因组中prophage1alkA‑ybdO、prophage3ydiM‑ydjJ、prophage6yobB‑yobO区域，减少基因组的冗余，提高菌株的代谢效率和稳定性，进而有效增加D‑泛酸的合成。

本发明授权一种稳定高产D-泛酸的工程菌及其构建方法与应用在权利要求书中公布了：1.一种稳定高产D-泛酸的工程菌，其特征在于：在所述工程菌中，过表达ysaA基因，敲除基因组中的spoIVB和spoIIIE基因，敲除prophage1、prophage3、prophage6区域； 其中，ysaA基因序列如SEQIDNo.2所示，spoIVB基因序列如SEQIDNo.4所示，spoIIIE基因序列如SEQIDNo.5所示； 所述敲除prophage1的方法为：以Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE为模板，以prophage1-L-F和prophage1-L-R为引物进行PCR扩增，得到prophage1上游同源臂；以Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE为模板，以prophage1-F和prophage1-R为引物进行PCR扩增，得到prophage1下游同源臂；以质粒p7z6为模板，以prophage1-zeo-F和prophage1-zeo-R为引物进行PCR扩增，得到prophage1的抗性筛选标记盒；将prophage1上游同源臂、prophage1下游同源臂、prophage1的抗性筛选标记盒进行融合PCR，得到启动子替换框；将启动子替换框转化至底盘菌中，替换底盘菌基因组上原有的prophage1区段，完成敲除prophage1，得到Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1； 所述敲除prophage3的方法为：以Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1为模板，以prophage3-L-F和prophage3-L-R为引物进行PCR扩增，得到prophage3上游同源臂；以Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1为模板，以prophage3-F和prophage3-R为引物进行PCR扩增，得到prophage3下游同源臂；以质粒p7z6为模板，以prophage3-zeo-F和prophage3-zeo-R为引物进行PCR扩增，得到prophage3的抗性筛选标记盒；将prophage3上游同源臂、prophage3下游同源臂、prophage3的抗性筛选标记盒进行融合PCR，得到启动子替换框；将启动子替换框转化至底盘菌中，替换底盘菌基因组上原有的prophage3区段，完成敲除prophage3，得到Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1△prophahe3； 所述敲除prophage6的方法为：以Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1△prophahe3为模板，以prophage6-L-F和prophage6-L-R为引物进行PCR扩增，得到prophage6上游同源臂；以Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1△prophahe3为模板，以prophage6-F和prophage6-R为引物进行PCR扩增，得到prophage6下游同源臂；以质粒p7z6为模板，以prophage6-zeo-F和prophage6-zeo-R为引物进行PCR扩增，得到prophage6的抗性筛选标记盒；将prophage6上游同源臂、prophage6下游同源臂、prophage6的抗性筛选标记盒进行融合PCR，得到启动子替换框；将启动子替换框转化至底盘菌中，替换底盘菌基因组上原有的prophage6区段，完成敲除prophage6，得到Bacillussubtilis168P43-panBpanCpanDpanEilvCilvDserCaspCysaA△spoIIIE△prophahe1△prophahe3△prophahe6； 引物prophage1-L-F、prophage1-L-R、prophage1-F、prophage1-R、prophage1-zeo-F、prophage1-zeo-R、prophage3-L-F、prophage3-L-R、prophage3-F、prophage3-R、prophage3-zeo-F、prophage3-zeo-R、prophage6-L-F、prophage6-L-R、prophage6-F、prophage6-R、prophage6-zeo-F、prophage6-zeo-R的序列如下所示： 。

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