陕西师范大学闫亚平获国家专利权
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龙图腾网获悉陕西师范大学申请的专利基于高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测GDP-L-岩藻糖的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119901853B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-31发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510267050.4,技术领域涉及:G01N30/06;该发明授权基于高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测GDP-L-岩藻糖的方法是由闫亚平;张亦鸣;张娅玲设计研发完成,并于2025-03-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测GDP-L-岩藻糖的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于高效液相色谱‑二极管阵列检测器定量检测GDP‑L‑岩藻糖的方法,该方法采用高效液相色谱进行分析,色谱条件为:AgilentC18色谱柱;以2.5~3.0gL2.72gL磷酸二氢钾水溶液含有0.2%~0.3%四丁基溴化铵,磷酸调pH3.5~4.5为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱,检测器为二极管阵列检测器,检测波长为254nm。该方法检出限低、精密度和准确度良好,不仅能够提供光谱信息对GDP‑L岩藻糖定性和定量分析,而且能够实时监控GDP‑L‑岩藻糖合成过程中的反应情况,为GDP‑L‑岩藻糖纯度、产率的提高和多功能FKP酶活性的筛选提供分析方法。
本发明授权基于高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测GDP-L-岩藻糖的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测GDP-L-岩藻糖的方法,其特征在于: 步骤1:制备GDP-L-岩藻糖供试品溶液:将320μL终浓度为1.95mgmLMn2+、1.875mgmL腺嘌呤核苷三磷酸、1.875mgmL鸟苷三磷酸、7.5mgmLpH7.5的Tris-HCl缓冲液、25.625mgmLL-岩藻糖和9.06mgmLFKP酶的反应体系放入37℃恒温培养振荡器225rpm震荡反应12h,腺嘌呤核苷三磷酸与鸟苷三磷酸完全反应后,经过100℃煮沸10min终止酶反应即可得到GDP-L-岩藻糖反应液;取上述GDP-L-岩藻糖反应液,室温下静置5min,然后将反应液10000rmin离心2min,取上层清液5μL注入进样小瓶,用移液枪将样品用水稀释1000倍,用0.22μm针头过滤器过滤,取续滤液,得到供试品溶液; 步骤2:配制不同质量浓度的GDP-L-岩藻糖标准工作溶液; 步骤3:采用高效液相色谱对不同质量浓度的GDP-L-岩藻糖标准工作溶液进行检测,检测波长为254nm,色谱条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;向2.5~3.0gL磷酸二氢钾水溶液中加入其质量0.2%~0.3%的四丁基溴化铵并用磷酸调节pH值为3.5~4.5后作为流动相A,以乙腈为流动相B,进行梯度洗脱,检测器为二极管阵列检测器,洗脱程序为:0~5分钟:流动相B体积百分比为10%;5~25分钟:流动相B体积百分数比由10%升高至35%;25~28分钟:流动相B体积百分比由35%降低至10%;28~30分钟:流动相B体积百分比为10%;记录色谱峰面积,以GDP-L-岩藻糖标准工作溶液的质量浓度为横坐标,对应的色谱峰面积为纵坐标进行线性回归,建立GDP-L-岩藻糖的标准工作曲线,计算线性回归方程; 步骤4:按照步骤3的色谱条件对步骤1的GDP-L-岩藻糖供试品溶液进行检测,并结合步骤3的线性回归方程计算供试品溶液中GDP-L-岩藻糖的含量。
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