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龙图腾网获悉中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院申请的专利一种丝素蛋白纳米颗粒水凝胶在治疗压疮性溃疡中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115957307B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-07发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211672006.4，技术领域涉及：A61K38/18；该发明授权一种丝素蛋白纳米颗粒水凝胶在治疗压疮性溃疡中的应用是由罗力文;李长青;田志强;张红玉;张扬;张诗育;阚雪薇设计研发完成，并于2022-12-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种丝素蛋白纳米颗粒水凝胶在治疗压疮性溃疡中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种丝素蛋白纳米颗粒水凝胶在治疗压疮性溃疡中的应用，涉及生物化学技术领域。其技术方案的核心要点包括以下步骤：S1.丝素蛋白溶液的制备；S2.纳米颗粒的制备；S3.外泌体中乳脂球表皮生长因子VIIIMFG‑E8的生产与制备；S4.MFG‑E8蛋白的纯化；S5.包被MFG‑E8的丝素蛋白纳米颗粒的制备；S6.交联NGR肽的MFG‑E8‑丝素蛋白纳米颗粒的制备；S7.胶原丝素蛋白水凝胶制备。本发明所提出的丝素蛋白纳米颗粒水凝胶作为一种无创治疗手段，在临床应用中更易获得患者的认可。此外，针对压疮部位的靶向性纳米颗粒治疗方法能够显著提高患者的治疗效果。

本发明授权一种丝素蛋白纳米颗粒水凝胶在治疗压疮性溃疡中的应用在权利要求书中公布了：1.一种丝素蛋白纳米颗粒水凝胶的制备方法，其特征是：所述水凝胶为负载交联NGR肽、包裹MFG-E8的丝素蛋白纳米颗粒的胶原丝素蛋白水凝胶，所述水凝胶的制备方法包括以下步骤： S1.丝素蛋白溶液制备； S101.取去除蚕蛹的家蚕蚕茧2g，放入1L水中，加入5-10gNa2CO3，使Na2CO3浓度为0.5%-1%，然后在90-100℃的水中煮30-60min，直至丝胶完全去除； S102.将去除丝胶的丝素在去离子水中洗涤3-5次，然后在60℃的烘箱中烘干； S103.配制50ml三元溶液，配制方法：双蒸水，乙醇，氯化钙分别为30.43ml，19.57ml，24g； S104.将蚕茧加入到三元溶液中，在60±5℃条件下溶解1-2h，直至丝素完全溶解成液体；4000rpmmin离心10min，收集上清； S105.将上清在截留分子量在8000-14000的透析袋中透析48h，透析完成后4000rpmmin离心10min，收集上清，并测定蛋白浓度； S2.纳米颗粒的制备； S201.将获取的丝素蛋白溶液稀释到10mgml，在15ml离心管中加入5ml丙酮溶液，将丙酮在涡旋混合器上涡旋，丙酮溶液与1%丝素蛋白溶液体积比为5:1，即将1ml质量分数为1%的丝素蛋白溶液滴加到丙酮中，滴加结束后，继续涡旋30-60s； S202.涡旋结束后，离心6000rpmmin，10min，倒掉上清收集沉淀； S203.加入双蒸水10ml洗涤，离心6000rpmmin，10min，倒掉上清收集沉淀，去除丙酮残留； S204.重复步骤S203； S205.在沉淀中加入5ml的双蒸水，在冰上进行超声，条件为：超声时间2min，暂停2s超声2s，振幅30%； S206.超声结束后，6000rpmmin，离心10min，获取乳白色上清； S207.乳白色上清继续12000rpmmin，离心10min，获得纳米颗粒沉淀，冷冻干燥后，获得纳米颗粒； S3.外泌体中乳脂球表皮生长因子VIIIMFG-E8的生产制备； S301.提取大鼠血管内皮原代细胞，进行扩增培养获得其分泌的外泌体； S302.对外泌体进行质谱检测分析，结果表明MFG-E8在外泌体中的含量丰富； S303.构建HBLV-r-MFG-E8-3xFlag-Green-PURO转染慢病毒； S304.37℃，5%CO2的孵箱中培养仓鼠卵巢细胞CHO-s细胞，静止条件下使CHO-s细胞贴壁，贴壁后转入慢病毒； S305.3天后加入嘌呤霉素挑选转入MFG-E8的CHO-s细胞； S306.待含有绿色荧光的CHO-s细胞达到80%左右后进行胰酶消化，细胞消化下来后进行离心，1000rpmmin,离心5min，收集细胞沉淀，加入CHO-s细胞专用培养基在摇床上培养，摇床转速为150rpmmin，使CHO-s细胞悬浮培养； S307.细胞在培养液生长，培养液由澄清变浑浊后进行离心1200rpmmin，离心5min，收集CHO-s细胞沉淀； S308.将沉淀的细胞在加入蛋白酶抑制剂PMSF的细胞裂解液中进行冰上裂解30-60min，蛋白酶抑制剂PMSF体积分数为1%； S309.裂解后进行超声，条件为：超声时间8s，暂停2s超声2s，振幅20%； S310.4℃条件下离心12000rpmmin，离心10min； S311.收集含有MFG-E8蛋白上清； S4.MFG-E8蛋白纯化； S5.包被MFG-E8的丝素蛋白纳米颗粒的制备； S501.将获取的丝素蛋白溶液稀释到20mgml，并将500ul纯化MFG-E8蛋白加入到500ul的2%丝素蛋白溶液中，使丝素蛋白浓度为1%； S502.在15ml离心管中加入5ml丙酮溶液，将丙酮在涡旋混合器上涡旋，丙酮溶液与含有MFG-E8纯化蛋白的丝素蛋白溶液体积比为5:1，即将1mlS501中的MFG-E8-丝素蛋白溶液滴加到丙酮中，滴加结束后，继续涡旋30-60s； S503.涡旋结束后，离心6000rpmmin，10min，倒掉上清收集沉淀； S504.加入双蒸水10ml洗涤，离心6000rpmmin，10min，倒掉上清收集沉淀，去除丙酮残留； S505.重复步骤S503和S504； S506.在沉淀中加入5ml的双蒸水，在冰上进行超声，条件为：超声时间3min，暂停3s超声2s，振幅30%； S507.超声结束后，3000rpmmin，离心10min，获取乳白色上清； S508.乳白色上清继续12000rpmmin，离心10min，获得纳米颗粒沉淀，冷冻干燥后，获得包被MFG-E8的丝素蛋白纳米颗粒； S6.交联NGR肽的MFG-E8-丝素蛋白纳米颗粒的制备； S601.取包被MFG-E8的丝素蛋白纳米颗粒，加入1ml双蒸水溶解纳米颗粒； S602.在1ml纳米颗粒溶液中加入10mgEDC，50mgHOOC-PEG-COOH及50mgNGR肽，在室温下、摇床上反应0.5-1h； S603.再加入10mg的NHS，在室温下、摇床上反应过夜； S604.第二天将纳米颗粒溶液在6000rpmmin条件下离心10min，丢弃上清，获得交联NGR肽的MFG-E8-丝素蛋白纳米颗粒沉淀； S7.富含交联NGR肽的MFG-E8-丝素蛋白纳米颗粒的胶原丝素蛋白水凝胶制备； S701.将提取的丝素蛋白溶液在10%-15%的聚乙烯醇20000溶液浓缩48h，使丝素蛋白溶液最终浓度为8%-10%； S702.取卡波姆0.24g，溶解到1ml的双蒸水中，制得溶液A； S703.取聚乙烯醇2g溶解于10ml的双蒸水中，其质量分数为20%； S704.取800ul的1molL的NaOH溶液加入到溶液A中，搅拌均匀，然后再加入800ul的20%聚乙烯醇，制得溶液B； S705.取8%-10%丝素蛋白溶液4ml，加入到溶液B中搅拌均匀，制得溶液C； S706.取2ml质量分数为1%胶原溶液，并加入1molL的NaOH溶液200ul，混合均匀后，加入到溶液C中，制得溶液D； S707.取交联NGR肽的MFG-E8-丝素蛋白纳米颗粒溶解在200ul的双蒸水中，并加入到溶液D中搅拌均匀，制得溶液E； S708.调节溶液E的pH值至6-7之间； S709.在湿润的环境中放置12-24h，直至其交联成胶； S710.检测胶原丝素蛋白水凝胶中纳米颗粒。

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