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龙图腾网获悉江苏璟泽生物医药有限公司;上海景泽生物技术有限公司;成都泽研生物技术有限公司申请的专利一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN110563832B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201910703218.6，技术领域涉及：C07K14/59；该发明授权一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法是由彭红卫;张玉晶;张磊;王冲;叶凡;俞峻红;赵家跟;李晓鹏;俞亚波设计研发完成，并于2019-07-31向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种高纯度重组促卵泡刺激素的纯化方法。具体地，包括步骤：a提供一含有重组促卵泡激素的原料液；b对所述原料液依次进行：b1硫酸铵沉淀；b2疏水相互作用色谱法HIC；b3低PH孵育灭活病毒；和b4反相色谱层析RPC；其中，步骤b1、b2、b3和b4不可以以任意次序进行。本发明的重组促卵泡刺激素相比已有的制备方法，简单易操作，并且用本发明的方法得到的重组FSH纯度可高达99.5％ww，比活性高达16000IUmg。

本发明授权一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法在权利要求书中公布了：1.一种高纯度重组促卵泡刺激素的纯化方法，其特征在于，由以下步骤组成： a提供一含有重组促卵泡激素的原料液； b对所述原料液依次进行： 步骤0：超滤， 形成粗制FSH的原料源自含有重组FSH的细胞培养物上清液； 在超滤步骤之前，在室温经1μm膜过滤清洁上清液；然后用截留分子量为10KD的超滤膜超滤；将超滤物浓缩为约8％； 步骤1：硫酸铵沉淀， 缓冲液：100％饱和度的NH42SO4溶液，pH7.4， 对来自步骤0的超滤物在室温下进行硫酸铵沉淀，将100％饱和度的NH42SO4溶液按45％比例缓慢加入来自步骤0的超滤物，边加边搅拌； 离心力3500g，20min，去沉淀，收集上清液； 上清液经0.65μm膜过滤； 步骤2：疏水相互作用色谱法HIC；选用PhenylSepharose6fastflow层析柱， A液：50mmolLNH4Ac+50％饱和度NH42SO4,pH7.4， B液：50mmolLNH4Ac,pH7.4， 1平衡：50mmolLNH4Ac+50％饱和度NH42SO4，pH7.4的HIC平衡液平衡柱子，平衡体积不低于2CV； 2上样：接收上一工序样品进行上样，调节上样流速，保证保留时间不低于5min； 3平洗：HIC平衡液洗柱，直到A280降至基线； 450mmolLNH4Ac+27.5％饱和度NH42SO4，pH7.4的HIC冲洗液冲洗杂蛋白，直到A280降至基线； 550mmolLNH4Ac，pH7.4±0.2的HIC洗脱液洗脱目的蛋白，收集A280主峰； 洗出液直接进入下一步骤；本步骤在室温下进行； 步骤3：低pH孵育灭活病毒， 缓冲液：0.5molL柠檬酸， 缓冲液：1.0molLTris， 用0.5molL柠檬酸调节步骤2的物质pH至3.6；样品于20℃静置孵育2.5小时；1molLTris调节样品pH至7.4；1400g离心20min；0.2μm膜过滤； 过滤液直接进入下一步骤；本步骤在室温下进行； 步骤4：反相色谱层析RPC；选用Source30RPC柱， RPC平衡液：50mmolLNH4Ac，pH7.4， RPC冲洗液A：50mmolLNH4Ac+10％异丙醇，pH7.4， RPC洗脱液:50mmolLNH4Ac+20％异丙醇，pH7.4， RPC冲洗液B:50mmolLNH4Ac+50％异丙醇，pH7.4， RPC清洗液：0.5molLNaOH， RPC保存液：0.01molLNaOH， 来自步骤3的洗出液直接上样；RPC平衡液冲洗层析柱，RPC冲洗液A冲洗，RPC洗脱液洗脱，收集洗脱峰；RPC冲洗液B冲洗；用RPC保存液冲洗并保存层析柱； 步骤5：凝胶过滤层析GFC，选用hiload26600superdex75prepgrade， GFC平衡液：10mmolLPB，pH7.0， GFC清洗液：0.5molLNaOH， GFC保存液：0.01molLNaOH， GFC平衡液平衡层析柱，RPC层析后收集的样品分次上样，GFC平衡液进行冲洗，出峰后收集第一个峰的样品，GFC清洗液洗柱，GFC保存液冲洗并保存层析柱； 步骤6：纳米膜过滤， 采用Millipore公司的20nm的VirosolvePro纳米膜滤器； 上一工序样品依次使用0.1μm的预过滤器、20nm的纳米膜滤器过滤，纳米膜滤器过滤量不超过13mlcm2；记录纳米膜滤器使用数量与每个滤器过滤体积； 所述重组促卵泡刺激素为rhFSH。

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