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河南亚都实业有限公司李洁获国家专利权

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龙图腾网获悉河南亚都实业有限公司申请的专利一种复合干细胞的活性生物材料的制备及其人工皮肤中的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116688234B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310055382.7,技术领域涉及:A61L27/40;该发明授权一种复合干细胞的活性生物材料的制备及其人工皮肤中的应用是由李洁;张正男;段书霞;许慧;敖宁建;付迎坤;潘红福;常聪设计研发完成,并于2023-01-16向国家知识产权局提交的专利申请。

一种复合干细胞的活性生物材料的制备及其人工皮肤中的应用在说明书摘要公布了:本发明是一种复合干细胞的活性生物材料的制备及其人工皮肤中的应用,有效的解决了现有方法制作成本较高、制作过程复杂、未用于活性物质研究的问题,包括双层结构的复合材料,下层为由活性脂质体与干细胞组成呈水凝胶状的活性材料层,上层为抗菌层,本发明制备巯基化透明质酸H活性因子复合水凝胶采用的制备方法比较温和,无需加入交联剂且含有大量活性成分,利用该机制环境可通过内皮细胞脂肪干细胞联合活性因子与血小板裂解物诱导血管新生并在体外快速构建微组织,有利于该支架在体外大规模培育人工皮肤基底层满足患者需求。

本发明授权一种复合干细胞的活性生物材料的制备及其人工皮肤中的应用在权利要求书中公布了:1.一种复合干细胞的活性生物材料的制备方法,其特征在于,包括双层结构的复合材料,下层为由活性脂质体与干细胞组成呈水凝胶状的活性材料层,上层为抗菌层; 所述活性脂质体的制备步骤为: 1将大豆磷脂与胆固醇按照5:2的质量比溶解于无水乙醇当中,溶解物置于真空旋蒸仪中,45℃温度,在转速为200rpm的条件下旋干,成均一的磷脂膜; 2加入pH为4的柠檬酸溶液,保持磷脂浓度为30mgmL,水化上述磷脂膜,然后置于超声波中超声分散均匀,300W,30s开30s关,每6mL脂质体超声1分钟; 3将上述液体转入浓度为100mM的磷酸钠溶液中,用截留分子量为3500Da的透析袋透析24h,即获得所需要的无内包封物的空白脂质体; 4包封活性因子的脂质体的制备:保持活性因子浓度为1mgmL,总体系中磷脂浓度为30mgmL条件下,用PBS溶解活性因子浓度为1mgmL加入空白脂质体中,于55℃的水浴摇床中孵育1小时后,将其于截留分子量为3500Da透析袋中,在4℃温度下透析24h,即获得包封活性因子脂质体; 5聚赖氨酸包覆活性因子脂质体的制备:配制浓度为10mgmL的ε-聚赖氨酸溶液,取4mL,在1200rpm转速旋转搅拌条件下,逐滴加入包封活性因子脂质体,保持转速搅拌1小时,取出,在4℃离心机中,以15000rpm转速,离心15分钟,用相应溶剂溶解后置于4℃下保存,即获得活性脂质体; 所述活性材料层的制备步骤为: 1首先是巯基化透明质酸的制备:取4g透明质酸加入1L蒸馏水中,搅拌溶解,配制成均一溶液;再将0.8gL-半胱氨酸盐酸盐加入到透明质酸溶液中;紧接着加入EDCNHS避光搅拌溶解,调节溶液pH至4.7,即获得接枝改性的巯基化透明质酸复合物;然后依次用pH为5的去离子水、浓度为1wt%的氯化钠溶液、pH为5的去离子水,分别透析3天,而后避光冷冻干燥得到巯基化透明质酸; 2其次是复合水凝胶的制备:取适量活性脂质体溶液超声后,搅拌器加入质量浓度为4%的巯基化透明质酸,溶解完毕后,加入质量分数为0.02%的α-酮戊二酸与1%的N-羟基琥珀酰亚胺复合物;在1000rpm搅拌转速下,逐步滴加浓度为1M的氢氧化钠溶液,调整体系pH为7-8,取出放入37℃水浴锅中成胶,然后将凝胶密封置于4℃冰箱备用; 3再次是负载干细胞的活性脂质体水凝胶制备:取适量活性脂质体溶液通过搅拌器加入质量分数为4%的巯基化透明质酸,溶解完毕后,加入质量分数为0.02%的α-酮戊二酸与1%的N-羟基琥珀酰亚胺复合物;将其置于超净台中,用0.22um的滤头过滤,经过紫外照射灭菌后,逐步滴加经过无菌的1M氢氧化钠溶液,调节体系至中性后,置于温度为37℃的二氧化碳培养箱中10分钟,稳定成胶;取出后加入含0.1%三抗的PBS溶液冲洗凝胶体系,再置于温度为37℃的二氧化碳恒温箱中温育30min;取出再加入干细胞专用培养基将其净化5-7遍;取培养至第三代的干细胞,调整细胞个数为104个毫升,吸取干细胞悬液1mL,加到凝胶表面,放入温度为37℃二氧化碳培养箱中,孵育24小时,即得到负载干细胞的活性脂质体水凝胶; 所述抗菌层由抗菌材料聚六甲基双胍与丝素蛋白通过静电纺丝组成,所述抗菌层的制备步骤为: 1丝素蛋白的提取:取削口蚕茧加入浓度为0.02M的碳酸钠水溶液中,煮沸,脱胶、直至无黄色胶质沉淀产生;用大量去离子水清洗脱胶蚕茧,洗净后烘干得到干态的丝素蛋白,取干态丝素蛋白于浓度为9.3M的溴化锂溶液中溶解4小时,透析并冻干得到冻干丝素蛋白; 2丝素蛋白聚六甲基双胍静电纺丝液的制备:将冻干丝素蛋白,用六氟异丙醇HFIP溶解为纺丝溶液,称取一定质量的聚六甲基双胍,在120rpm的转速下,溶解于纺丝溶液中,聚六甲基双胍在静电纺丝液中的质量体积比为0.3-1wt%; 3丝素蛋白聚六甲基双胍静电纺丝膜的制备:取上述纺丝液于18G针头配备的注射器中,置于静电纺丝机上,在电压为23KV,接收距离为10-12cm条件下电纺,纺丝完毕的样品,恒温真空干燥箱中干燥去除未挥发的溶剂,即获得抗菌材料层。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人河南亚都实业有限公司,其通讯地址为:453400 河南省新乡市长垣市蒲西区建蒲西路234号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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