大连理工大学;深圳近邻生物科技有限公司程昉获国家专利权
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龙图腾网获悉大连理工大学;深圳近邻生物科技有限公司申请的专利一种mRNA分离纯化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118956858B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411362926.5,技术领域涉及:C12N15/10;该发明授权一种mRNA分离纯化方法是由程昉;汤雨琪;林佳奇;刘宇阳;王依设计研发完成,并于2024-09-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种mRNA分离纯化方法在说明书摘要公布了:本发明公开一种mRNA分离纯化方法,属于生物技术领域。本发明的方法主要包括提取待分离的核酸样品并调整至适合纯化的浓度,根据目标mRNA的特性选择合适的亲和层析介质,配制含盐的缓冲液,根据核酸类型调整pH和盐浓度,将亲和层析介质装入色谱柱中,选择洗脱条件;将核酸样品溶于进样液后加载至色谱柱中,利用亲和层析介质捕获mRNA,泵入洗脱液进行逐级梯度洗脱,收集纯化的mRNA。本发明所述的mRNA分离纯化方法能够实现mRNA的高选择、高纯度、高收率纯化,易于放大反应,具有很好的实际应用价值。
本发明授权一种mRNA分离纯化方法在权利要求书中公布了:1.一种mRNA分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤: 1样品准备:提取待分离的核酸样品并调整至适合纯化的浓度; 2亲和层析介质选择:根据目标mRNA的特性选择合适的亲和层析介质; 3缓冲液配制:配制含盐的缓冲液,根据核酸类型调整pH和盐浓度; 4色谱系统设置:将步骤2得到的亲和层析介质装入色谱柱中,选择洗脱条件; 5样品加载:将步骤1得到的核酸样品溶于进样液后加载至色谱柱中,利用亲和层析介质捕获mRNA; 6洗脱和收集:泵入洗脱液进行逐级梯度洗脱,收集纯化的mRNA; 步骤2中所述的亲和层析介质为6FF-BVS-Odt-Cys,所述的6FF-BVS-Odt-Cys是以琼脂糖凝胶6FF为基质,双乙烯砜基甲烷BVS为连接臂连接寡聚核苷酸探针oligodT,最后用半胱氨酸进行封闭,得到的mRNA亲和层析介质;亲和层析介质中oligodT密度为0.05-0.25μmolmL; 进样液为氯化锂溶液与步骤3配制的含盐的缓冲液按照体积比1:1-1:20复配而成,协同促进mRNA与亲和层析介质结合,氯化锂溶液浓度为0.5-5M; 步骤6中所述的梯度洗脱具体为分别使用0.5MNaCl水溶液、0.1MNaCl水溶液、超纯水逐级浓度梯度洗脱,流速控制在0.2-0.5mLmin,压力为0.01-0.30MPa,温度为室温,在紫外吸收波长260nm处检测到吸收峰时,收集mRNA,直至吸收峰回基线停止收集。
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