华南农业大学刘极龙获国家专利权
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龙图腾网获悉华南农业大学申请的专利子宫基质细胞特异性基因编辑小鼠的构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119120466B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411191475.3,技术领域涉及:C12N15/113;该发明授权子宫基质细胞特异性基因编辑小鼠的构建方法是由刘极龙;赵久麒设计研发完成,并于2024-08-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本子宫基质细胞特异性基因编辑小鼠的构建方法在说明书摘要公布了:本发明属于分子生物学技术,公开了子宫基质特异性基因编辑小鼠的构建方法,本发明基于CRISPR‑Cas9的基质特异性基因编辑鼠。由Vim作为特异性启动子的Cre鼠,激活Cas9,Cas9鼠不仅解决了传统Cre鼠的繁育复杂的问题,在无需纯合的情况下就可实现一种组织特异性敲除。Cas9鼠可以用于多种sgRNA的敲除,为基因编辑模型的开发提供更多的可能性。将得到的Cas9鼠与sgMettl3报告鼠交配,成功在子宫基质细胞内向导敲除Mettl3基因。本发明为子宫内膜基因研究提供了宝贵的基因编辑模型,克服了双特异性位点介导基因敲除难的挑战。
本发明授权子宫基质细胞特异性基因编辑小鼠的构建方法在权利要求书中公布了:1.一种子宫基质细胞特异性基因敲除的Cas9小鼠的构建方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、构建Vimfsf-Cre+小鼠:体外转录获得Cas9mRNA和靶向Vim基因的sgRNA;以BAC克隆RP23-14I24为模板,构建用于敲入Vim基因的DNA片段的同源重组载体;将Cas9mRNA、sgRNA和同源重组载体转入小鼠受精卵中,后通过基因型筛选获得; 其中,所述靶向Vim基因的sgRNA的序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示;所述用于敲入Vim基因的DNA片段5’端到3’端依次包括上游同源臂、FRT-6xSV40pA-FRT-Kozak-iCre-WPRE-BGHpA表达框和下游同源臂;所述上游同源臂的核苷酸序列为Vimentin基因的第1外显子的起始密码子的5’端紧邻序列,所述下游同源臂的核苷酸序列为Vimentin基因的第1外显子的起始密码子的3’端紧邻序列,所述FRT-6xSV40pA-FRT-Kozak-iCre-WPRE-BGHpA表达框的序列如SEQIDNO:3所示; S2、构建PgrFlpo+小鼠:将2A-flop序列插入到Pgr基因的3'UTR中,后通过基因型筛选获得; S3、构建Pgrflpo+-Vimfsf-Cre+小鼠:将Vimfsf-Cre+小鼠与PgrFlpo+小鼠杂交,通过基因型筛选获得双阳鼠Pgrflpo+-Vimfsf-Cre+小鼠; S4、将Pgrflpo+-Vimfsf-Cre+小鼠与Rosa26lsl-Cas9+小鼠杂交,通过基因型筛选获得三阳鼠Pgrflpo+-Vimfsf-Cre+-Rosa26lsl-Cas9+小鼠,即可实现子宫基质细胞特异性基因敲除的Cas9小鼠。
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