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龙图腾网获悉苏州依科赛生物科技股份有限公司申请的专利一种定向iPSC分化为iNK的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120775787B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511293613.3，技术领域涉及：C12N5/0783；该发明授权一种定向iPSC分化为iNK的方法是由陈英;林家会;马士棋;陈旭;陈刚设计研发完成，并于2025-09-11向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种定向iPSC分化为iNK的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及细胞分化技术领域，具体涉及一种定向iPSC分化为iNK的方法。具体为：一种在摇床上制备得到CD34+造血干祖细胞和iNK的方法，所述方法包括iPSC在摇床上形成胚状体EB，然后通过收集单细胞上清获得iNK。本发明通过调整因子浓度，上清收取方式，获得高比例的CD34+造血干祖细胞并进一步诱导分化成iNK，本发明分批收获的iNK可达到一个iPSC扩增前即可收获100个以上的iNK。

本发明授权一种定向iPSC分化为iNK的方法在权利要求书中公布了：1.一种定向iPSC分化为iNK的方法，其特征在于，包括以下步骤： 第一阶段：在前1天—0天间iPSC诱导分化形成拟胚体； 第二阶段：在0天—2天间拟胚体诱导分化形成中胚层细胞； 第三阶段：在1天—6天间中胚层细胞诱导分化形成CD34+生血内皮细胞； 第四阶段：在4天—9天间CD34+生血内皮细胞诱导分化形成CD34+CD45+细胞； 第五阶段：在8天—28天间形成iNK； 所述第一阶段，前1天时，用细胞解离试剂将细胞消化成单细胞，1200rpm离心5min后用mTeSR重悬并以1×105细胞数mL的密度，将细胞接种于低吸附的六孔板中，并加入15μMY27632，随后置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞24小时，以形成拟胚体； 所述第二阶段，0天时，基础为EB分化培养基，加入10μMCHIR99021，将细胞离心换液，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞24~48小时； 所述EB分化培养基由以下成分组成：体积比47%的IMDM培养基、体积比47%的F12培养基、体积比1%的ITS液体培养基补充剂、体积比1%的脂质浓缩液、2mM的L-谷氨酰胺以及6gL的人血白蛋白； 所述第三阶段，在1天—3天间中胚层细胞诱导分化形成CD34+生血内皮细胞； 1天时，在所述EB分化培养基加入因子5ngmLBMP4，50ngmLVEGF，10ngmLbFGF，将板子倾斜45°，待细胞沉降后，去除上清，将细胞更换为此培养基，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞48小时，然后全换液此培养基再培养24小时； 所述第四阶段：在4天—7天间CD34+生血内皮细胞诱导分化形成CD34+CD45+细胞； 4天时，在基础为所述EB分化培养基，加入因子50ngmLVEGF，10μMSB431542，10ngmLbFGF，将板子倾斜45°，待细胞沉降后，去除上清，将细胞更换为此培养基，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞96小时，每48h更换一次新的培养基； 或者，所述第三阶段，在2天—4天间中胚层细胞诱导分化形成CD34+生血内皮细胞； 2天时，在所述EB分化培养基加入因子5ngmLBMP4，50ngmLVEGF，10ngmLbFGF，将板子倾斜45°，待细胞沉降后，去除上清，将细胞更换为此培养基，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞72小时，每48小时完全更换一次此培养基； 所述第四阶段：在5天—7天间CD34+生血内皮细胞诱导分化形成CD34+CD45+细胞； 5天时，以基础为所述EB分化培养基，加入因子50ngmLVEGF，10μMSB431542，10ngmLbFGF，将板子倾斜45°，待细胞沉降后，去除上清，将细胞更换为此培养基，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞72小时，每48h更换一次新的培养基； 所述第五阶段，具体包括如下步骤： 8天时，将第四阶段收获的EB球体重悬于iNK分化培养基1中，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，在摇床上，80rpm培养细胞48小时； 所述iNK分化培养基1为：以OptiVitroNK细胞扩增无血清培养基P01为基础，加入如下成分：20ngmLSCF、20ngmLIL-7、10ngmLFlt3、10ngmLIL-15、5ngmLIL-3以及10%体积比的人AB血清； 10天时，补充iNK分化培养基1，继续培养96小时； 14天时，每72h半换液一次iNK分化培养基2，5%CO2，37℃恒温培养箱中培养至28天满； 所述iNK分化培养基2为：以OptiVitroNK细胞扩增无血清培养基P01为基础，加入如下成分：20ngmLSCF、20ngmLIL-7、10ngmLFlt3、10ngmLIL-15、以及10%体积比的人AB血清； 所述第一阶段前，还包括前置阶段，所述前置阶段具体包括如下步骤： 前4天时，在TC六孔板中加入基质胶，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，包被一个小时以上； 选择复苏后传了三代及以上的iPSC，汇合度达到50%以上时再进行传代，加入细胞温和消化酶，37°消化5~10min，去掉消化液后，用mTeSR将细胞吹下，接种到板子中，置于5%CO2，37℃恒温培养箱中，培养细胞，每日换液。

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