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龙图腾网获悉上海海洋大学申请的专利一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119791068B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510047206.8，技术领域涉及：C12N15/113；该发明授权一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法是由陈良标;鲁纪刚;黄松钱;胡鹏;李玮;魏世涔;黄思琪设计研发完成，并于2025-01-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法，包括：利用CRISPRCas9基因编辑技术对鱼类kdm6bb基因进行敲降处理，通过基因型鉴定获得kdm6bb杂合子kdm6bb+‑；通过杂合子鱼的自交，获得有效降低kdm6bb蛋白表达的kdm6bb杂合突变体；通过性别分子标记筛选具有XY性别遗传型的伪雌鱼，与野生型XY雄鱼交配，筛选不含kdm6bb突变的YY性别遗传型超雄鱼，与野生型XX雌鱼杂交，获得不携带kdm6bb突变的全雄鱼群体，实现鱼类单性养殖，提高性别控制育种的效率，在以XXXY性别决定为基础的水产经济鱼类中表现广泛的适应性。

本发明授权一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法在权利要求书中公布了：1.一种基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法，其特征在于， 通过kdm6bb基因敲降技术构建kdm6bb杂合子模型，获得XY遗传型的伪雌鱼；所述伪雌鱼与野生型XY遗传性别雄鱼进行交配，筛选没有基因编辑YY遗传性别的超雄鱼，并与XX野生型雌鱼杂交，获得XY遗传性别的全雄后代，实现鱼类全雄控制育种； 所述kdm6bb基因敲降技术构建kdm6bb杂合子模型的方法包括： 采用CIRSPRCas9基因编辑技术对组蛋白去甲基化酶kdm6bb基因进行切割，获得杂合子后代，降低kdm6bb蛋白的表达，诱导XY遗传型鱼类发育为伪雌鱼； 所述基于kdm6bb基因敲降技术构建无基因编辑全雄鱼的方法包括如下步骤： S1，利用基因编辑技术敲除kdm6bb基因，获得kdm6bb杂合子鱼，基因型为kdm6bb+-； S2，将所述kdm6bb杂合子鱼进行自交，通过基因型鉴定获得遗传性别XY的kdm6bb杂合子鱼，其生理性别表现为雌性，标记为kdm6bb+-XY伪雌鱼； S3，将所述kdm6bb+-XY伪雌鱼与kdm6bb++XY野生型雄鱼进行交配，筛选kdm6bb++YY的超雄鱼； S4，将所述kdm6bb++YY的超雄鱼与kdm6bb++XX野生型雌鱼进行交配，获得的后代均是kdm6bb++XY基因型雄性，实现鱼类性别控制育种与单性群体养殖； 所述鱼类为kdm6bb敏感型、雄性异配遗传决定型的鱼类； 步骤S1中，所述基因编辑技术为采用CRISPRCas9系统特异性切割鱼类的kdm6bb基因，实现鱼类kdm6bb基因的敲除，阻断鱼类组蛋白去甲基化反应，抑制雄性发育基因表达；其中，获得kdm6bb杂合子鱼的过程为： S11，根据鱼类kdm6bb基因序列，设计gRNA靶点，体外转录合成gRNA，gRNA包括gRNA1和gRNA2，序列如下表所示： gRNA1 GGGAACCGCGCCAGAGAGAT gRNA2 GGCAGGAGGCCACCACATTA S12，在鱼类受精卵I细胞期，将sgRNA与Cas9蛋白按照预定比例配制注射混合液，对受精卵进行共注射； S13，将注射的受精卵置于28℃循环水中孵化； S14，利用特异性引物进行kdm6bb基因型鉴定，获得kdm6bb杂合子鱼； 步骤S2中，对kdm6bb杂合子鱼进行自交，筛选获得遗传性别XY的kdm6bb杂合子鱼，生理性别为雌性，标记为kdm6bb+-XY伪雌鱼；其中获得kdm6bb+-XY伪雌鱼的过程为： S21，将kdm6bb+-杂合子鱼饲养至性成熟，自然交配产卵受精，28℃循环水中孵化饲养： S22，利用特异性引物序列对自交后代进行kdm6bb基因型鉴定，利用性别分子标记引物对自交后代进行遗传性别鉴定，获得kdm6bb杂合子、遗传性别为XY，生理性别为雌性的个体，标记为kdm6bb+-XY伪雌鱼； 步骤S3中，将kdm6bb+-XY伪雌鱼与野生型XY雄鱼进行交配，通过基因型鉴定筛选出kdm6bb++YY超雄鱼；其中，获得kdm6bb++YY超雄鱼的过程为： S31，将kdm6bb+-XY伪雌鱼在28℃循环水中饲养至性成熟； S32，将kdm6bb+-XY伪雌鱼与野生型kdm6bb++XY雄鱼自然交配产卵受精，28℃循环水中孵化饲养： S33，利用特异性引物序列对后代进行kdm6bb基因型鉴定，利用性别分子标记引物对自交后代进行遗传性别鉴定，获得kdm6bb无突变、遗传性别为YY、生理性别为雄性的超雄鱼，标记为kdm6bb++YY超雄鱼； 步骤S4中，将kdm6bb++YY超雄鱼与野生型XX雌鱼进行交配，通过基因型鉴定确定kdm6bb无基因突变，遗传性别为XY的全雄群体；其中，获得kdm6bb++XY全雄群体的过程为： S41，将kdm6bb++YY超雄鱼与野生型XX雌鱼自然交配产卵受精，28℃循环水中孵化饲养： S42，利用特异性引物序列对后代进行kdm6bb基因型鉴定，利用性别分子标记引物对自交后代进行遗传性别鉴定，获得kdm6bb无突变、遗传性别为XY、生理性别为雄性的全雄群体，实现鱼类性别控制育种与单性群体的养殖； 获得有效突变kdm6bb杂合子鱼过程为：对F0和F1代个体进行目的基因片段扩增和测序，检测基因突变情况，筛选有效突变的杂合子后代； 对后代进行遗传性别有效鉴定：提取后代基因组DNA，进行目的检测片段扩增和电泳，根据PCR产物大小鉴定遗传性别； 所述伪雌鱼为具有正常卵巢结构和成熟卵子发育的雌鱼； 所述超雄鱼正常精巢结构和成熟精子发生的雄鱼； 通过分子标记筛选kdm6bb+-XY伪雌鱼和kdm6bb++YY超雄鱼。

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