广东医科大学附属医院陈康梅获国家专利权
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龙图腾网获悉广东医科大学附属医院申请的专利改进的miR-OE骨架及其构建方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119842703B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510010756.2,技术领域涉及:C12N15/113;该发明授权改进的miR-OE骨架及其构建方法和应用是由陈康梅;叶巧茹;刘明冬;吴志辉;荆凯鹏设计研发完成,并于2025-01-03向国家知识产权局提交的专利申请。
本改进的miR-OE骨架及其构建方法和应用在说明书摘要公布了:本发明涉及一种基于miR‑30骨架的骨架及其构建方法及其在RNAi中的应用。所述骨架构建方法包括以下步骤,以已有shRNAmiR30载体作为PCR模板;设计两对含有靶基因的siRNA的互补重叠引物,分别为引物F1和R1,引物F2和R2,分别进行扩增,以得到的P1、P2为模板,以引物F1和R2为上下游引物进行OE‑PCR,获得miR‑OE。进一步,本发明所述的构建方法中还进行了miR‑OE骨架中茎环结构与EcoRI酶切位点的回复突变。本发明的miR‑OE骨架和miR‑OE‑EL构建方法中所需合成的引物均为长度小于60nt的短链,合成难度和成本均有效降低,而且引物设计更加灵活;且miR‑OE‑EL骨架对靶基因的干扰效率均明显提高,能够很好地应用于制备shRNA药物。
本发明授权改进的miR-OE骨架及其构建方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种miR-OE骨架的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤, 以miR-30为骨架的shRNAmiR载体作为PCR模板; 设计两对含有靶基因的siRNA的互补重叠引物,分别为引物F1和R1,引物F2和R2,其中F1和R2分别为带有酶切位点的,能扩增模板中miR-30骨架的5′UTR和3′UTR的序列;所述R1依次由miR-30骨架的固定环序列19个核苷酸序列,靶基因的siRNA和对应部分5′UTR组成;F2依次由miR-30骨架的固定环序列的19个核苷酸序列,靶基因的siRNA和对应部分3′UTR组成;引物F1,R1能扩增所述5′UTR全长,引物F2和R2能扩增所述3′UTR全长; 分别进行扩增,所述引物F1和R1扩增得到扩增产物P1,所述引物F2和R2扩增得到扩增产物P2, 以扩增产物P1、扩增产物P2为模板,以引物F1和R2为上下游引物进行OE-PCR,获得PCR产物即miR-OE骨架; 所述F1的序列如SEQIDNO:1所示,或所述F1的序列如SEQIDNO:1所示,但酶切位点不同;和所述R2的序列如SEQIDNO:4所示,或所述R2的序列如SEQIDNO:4所示,但酶切位点不同;以及 所述R1如SEQIDNO:25所示,所示F2如SEQIDNO:26所示;或 所述R1如SEQIDNO:27所示,所示F2如SEQIDNO:28所示;或 所述R1如SEQIDNO:25所示,所示F2如SEQIDNO:33所示;或 所述R1如SEQIDNO:27所示,所示F2如SEQIDNO:33所示。
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