重庆生命知源科技有限公司徐俊获国家专利权
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龙图腾网获悉重庆生命知源科技有限公司申请的专利一种适于流式细胞仪分析的玉米叶片细胞核解离液及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119880545B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411902701.4,技术领域涉及:G01N1/28;该发明授权一种适于流式细胞仪分析的玉米叶片细胞核解离液及其应用是由徐俊;张洁梅设计研发完成,并于2024-12-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种适于流式细胞仪分析的玉米叶片细胞核解离液及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种适于流式细胞仪分析的玉米叶片细胞核解离液及其应用,属于流式细胞仪分析技术领域。本发明使用复配的解离液浸润处理玉米叶组织,再经过刀片划痕操作,相比传统液氮研磨及消化技术,极大解决材料损耗大问题,减少样本浪费,降低组织碎片污染,提高细胞核纯度与质量,为后续实验提供可靠样本基础;相较于机械切割分离法,解离更充分,对组织用量要求大幅降低,对珍贵稀缺样本意义重大,利于少量样本开展科研,推动相关研究领域拓展。本发明制备的荧光探针无重金属元素,降低了细胞毒性,光稳定性出色,尺寸小能进入细胞核,在复杂水环境中溶解性良好,适应多种实验条件,为精准稳定的细胞核成像提供有力支持。
本发明授权一种适于流式细胞仪分析的玉米叶片细胞核解离液及其应用在权利要求书中公布了:1.一种适于流式细胞仪分析的玉米叶片细胞核解离液的应用,其特征在于:包括以下步骤: a.收集真叶数为2的新鲜玉米叶片,将叶片组织置于预冷的玻璃板上,加入1mL预冷的解离液,用无菌的手术刀片进行快速划痕,划痕时间2min,切碎后用4mL的预冷的解离液将切碎的样本冲洗到无菌的15mL的EP离心管中,在室温的条件下置于摇床上5min解离玉米叶片组织,即可得到玉米叶片组织细胞核溶液; b.将玉米叶片组织细胞核溶液在4℃预冷的离心机中进行低速离心,去除上清,得到玉米叶片组织细胞核沉淀; c.向玉米叶片组织细胞核沉淀中加入5mL解离清洗液进行重悬,在4℃预冷离心机中进行低速离心,去除上清,得到纯化后的玉米叶片组织细胞核沉淀; d.向纯化后的玉米叶片组织细胞核沉淀中加入1mL解离清洗液重悬,混匀后用移液枪吸取上细胞溶液10μL至新的EP管中,再加入等体积的碳量子点荧光探针进行染色,在显微镜下观察细胞核完整性; e.对玉米叶片组织细胞核收集及进行流式细胞仪分析; 所述碳量子点荧光探针通过以下步骤制备: S1、将3,3',6,6'-四羧酸-2,2'-联吡啶加入到乙二醇和DMF的混合溶液中,然后超声10-15min得到第一溶液,之后将第一溶液加入到聚四氟乙烯水热反应釜中,加入0.5molL的全氟碘己烷的DMF溶液和有机金属引发剂,在180-220℃下水热反应3-15h; S2、反应结束,待水热反应釜冷却到室温后,得到第二溶液,进行过滤、透析提纯; S3、将透析提纯后的溶液减压除去溶剂,干燥后得到所述碳量子点荧光探针。
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