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龙图腾网获悉昆山亚香香料股份有限公司申请的专利异丁香酚单加氧酶突变体在异丁香酚香兰素生产中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120400079B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510355124.X，技术领域涉及：C12N9/02；该发明授权异丁香酚单加氧酶突变体在异丁香酚香兰素生产中的应用是由周泳含;汤子骏;陈洲;王圣设计研发完成，并于2025-03-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本异丁香酚单加氧酶突变体在异丁香酚香兰素生产中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了异丁香酚单加氧酶突变体在异丁香酚香兰素生产中的应用，包括重组菌种构建、重组菌种的发酵培养和发酵液的催化反应，其中异丁香酚单加氧酶突变体通过野生菌WT的异丁香酚单加氧酶氨基酸序列进行突变，并通过大肠杆菌进行表达所得菌体，所形成一系列对香兰素生产催化效率有促进作用的菌体。本发明通过筛选得到催化转化率高达98.5％以上的突变体超高效酶催化剂，避免传统化工催化剂生产的低效、污染和高能耗等缺点，使其更适于绿色工业化生产需求，值得推广至工业化使用。

本发明授权异丁香酚单加氧酶突变体在异丁香酚香兰素生产中的应用在权利要求书中公布了：1.异丁香酚单加氧酶突变体在异丁香酚生产香兰素中的应用，其特征在于，所述异丁香酚单加氧酶突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.13所示； 所述应用包括以下步骤： S1、重组菌种构建： 所述异丁香酚单加氧酶突变体通过大肠杆菌BL21DE3进行表达，筛选得到重组工程菌种；重组工程菌种通过培养制得甘油菌； S2、重组菌种的发酵培养： S201、种子液制备： 取6个甘油菌，每个甘油菌取100μL接种到100mL的M1培养基中，于35℃、220rpm条件下培养9小时以获得复苏种子液； 随后，取1mL复苏种子液接种至100mLM2培养基中，继续在35℃、220rpm条件下培养4小时，以制备扩培种子液； 所述M1培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨10gL、酵母浸粉5gL和氯化钠10gL，其余为纯化水； 所述M2培养基包括以下浓度的组分：蛋白胨16gL、酵母浸粉10gL和氯化钠10gL，其余为纯化水； S202、发酵培养： 准备2LM3培养基，称取20g葡萄糖并定容至25mL后进行独立灭菌，然后加入培养基中；初始发酵条件设定为200rpm搅拌速度、通气量2、罐压0.25MPa、pH值7.0；维持搅拌关联溶氧在30%，通过添加氨水来控制pH值为7.0，并使用80%葡萄糖溶液进行补料； 所述M3培养基包括以下浓度的组分：十二水磷酸氢二钠17gL、磷酸氢二钾3gL、氯化钠0.5gL、七水硫酸镁0.5gL、葡萄糖10gL、硫酸铵15gL和氯化铵1gL，其余为纯化水，氨水调节pH为7.0； S203、降温诱导： 当OD600达到30时，将发酵罐温度降至25℃，并添加终浓度为0.6mML的IPTG以诱导目标基因的表达；发酵过程持续约24小时，直至OD600不再增长，此时停止发酵，得到发酵液；随后，取发酵液进行蛋白凝胶电泳分析，得出最终OD值及蛋白浓度； S3、发酵液的催化反应： NaOH调节发酵液至pH=10.5，添加异丁香酚至底物浓度为25gL进行催化，催化条件：35℃，180rpm，维持pH=10.5，连续催化16h过夜；反应后取样，用于HPLC检测香兰素产量及转化率。

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