中国计量科学研究院;苏州源启生物科技有限公司李浩正获国家专利权
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龙图腾网获悉中国计量科学研究院;苏州源启生物科技有限公司申请的专利基于实时荧光定量检测的抗体TaqDNA聚合酶活性绝对定值方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120464713B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510969722.6,技术领域涉及:C12Q1/6851;该发明授权基于实时荧光定量检测的抗体TaqDNA聚合酶活性绝对定值方法是由李浩正;武利庆;邢亚东设计研发完成,并于2025-07-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于实时荧光定量检测的抗体TaqDNA聚合酶活性绝对定值方法在说明书摘要公布了:本发明涉及分子生物学检测技术领域,特别是涉及基于实时荧光定量检测的抗体TaqDNA聚合酶活性绝对定值方法,包括以下步骤,首先,通过不同浓度的双链λDNA与荧光染料反应,建立DNA含量与荧光值的标准曲线,接着,以M13单链DNA为模板,在特定反应体系中进行延伸反应,实时记录荧光值,计算净荧光值并建立其与反应时间的线性关系,利用标准曲线换算出不同时间点新生成的双链DNA量,进一步计算dNTPs消耗量,最后依据抗体TaqDNA聚合酶活力定义,得出其绝对活性,整个过程结合荧光检测与标准曲线,实现了对酶活性的精准测定。
本发明授权基于实时荧光定量检测的抗体TaqDNA聚合酶活性绝对定值方法在权利要求书中公布了:1.基于实时荧光定量检测的抗体TaqDNA聚合酶活性绝对定值方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤: a以不同浓度双链λDNA为标准品,加入饱和核酸荧光染料,记录荧光值,构建双链λDNA含量与荧光值的标准曲线; b以M13噬菌体单链DNA为模板,在含有M13R引物、dNTPs及饱和核酸荧光染料的反应体系中,加入待测抗体TaqDNA聚合酶引发延伸反应,在74℃条件下实时记录不同时间点的荧光值; c计算反应过程中不同时间点的净荧光值,建立净荧光值与反应时间的线性关系; d根据步骤a建立的标准曲线,计算步骤c中不同时间点新生成的双链DNA量; e根据新生成双链DNA量计算dNTPs消耗量; f根据抗体TaqDNA聚合酶活力定义,计算待测抗体TaqDNA聚合酶的绝对活性; 所述饱和核酸荧光染料为EvaGreen荧光染料,其终浓度为0.8×; 所述步骤b中的M13R引物序列为5′-GTTGTAAAACGACGGCCAG-3′; 所述步骤e中dNTPs消耗量的计算公式为: dNTPs消耗量nmol=新生成双链DNA量ng2×324.5, 其中,2代表双链DNA由2条单链DNA组成,324.5是dNTP的相对平均分子质量; 所述步骤f中待测抗体TaqDNA聚合酶活性的计算公式为: 酶量U=新生成双链DNA量ng×32×324.5×10=新生成双链DNA量ng×4.62×10-4, 其中,新生成双链DNA量为10分钟内生成量,乘以3代表30分钟内生成量,除以10代表30分钟内消耗dNTP量是10nmol的几倍。
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