河南牧业经济学院李聪聪获国家专利权
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龙图腾网获悉河南牧业经济学院申请的专利基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统沙门氏菌的快速检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116144803B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210891346.X,技术领域涉及:C12Q1/689;该发明授权基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统沙门氏菌的快速检测方法是由李聪聪;牛丽珠;刘昆;霍永;吴姣;徐永杰;王昊鹏;姜东凤;李婉涛;徐秋良;陶大刚;谢胜松设计研发完成,并于2022-07-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统沙门氏菌的快速检测方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种基于LAMP‑CRISPRCas12a系统检测沙门氏菌的快速高效低成本的可视化检测方法,涉及病原微生物检测技术领域。本发明利用特异性检测沙门氏菌的sgRNA和Cas12a组装的复合物识别并结合LAMP扩增产物,激活Cas12a的附属切割活性,从而对荧光标记的DNA进行酶切,发出的荧光信号可指示检测样品中是否含有沙门氏菌。为沙门氏菌的检测提供高灵敏度、高特异性、低成本、可视化且方便快捷的检测方法。
本发明授权基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统沙门氏菌的快速检测方法在权利要求书中公布了:1.一种非诊断目的的基于LAMP-CRISPRCas12a系统沙门氏菌的快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤: 1提取待测样品的基因组DNA; 2设计sgRNA和包含sgRNA的PCR引物,采用PCR结合Cas12a酶切方法筛选得到目标sgRNA;所述sgRNA是针对沙门氏菌的致病基因SipB序列及PAM序列所设计的,其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示;PCR引物的核苷酸序列如SEQIDNO.11、12所示,用于普通PCR结合Cas12a酶切筛选得到目标sgRNA; 3设计LAMP引物,以步骤1提取的基因组DNA作为模板,进行LAMP扩增;所述LAMP引物序列如SEQIDNO.13-18所示,LAMP的靶标序列中包含目标sgRNA,其中包括外引物F3,F3的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示;外引物B3,B3的核苷酸序列如SEQIDNO.14所示;内引物FIP,FIP的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示;内引物BIP,BIP的核苷酸序列如SEQIDNO.16所示;环引物LF,LF的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示;环引物LB,LB的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示; 4以步骤1提取的基因组DNA作为模板,步骤2设计的PCR引物,扩增特异致病基因SipB,构建至pMD-19T克隆载体,构建pMD19T-SipB质粒;以十倍比例倍比稀释质粒作为LAMP扩增的模板; 5荧光可视检测,将LAMP扩增产物、Cas12a、荧光探针、目标sgRNA、NEBBuffer2.1混匀,孵育10~30min,在蓝光或紫外光下裸眼可视对样品中沙门氏菌的定性检测。
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