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龙图腾网获悉武汉科技大学申请的专利一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119842825B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-28发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510094332.9，技术领域涉及：C12N15/867；该发明授权一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法是由邓文生;杨优;李永卓设计研发完成，并于2025-01-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法在说明书摘要公布了：本发明涉及糖尿病治疗技术领域，公开了一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法，该方法首先克隆并筛选出可响应葡萄糖变化调节基因表达的启动子；然后构建响应葡萄糖变化表达胰岛素融合基因的慢病毒载体，将筛选出的启动子替代慢病毒载体上的原有启动子，驱动下游胰岛素融合基因的表达；接着将构建好的慢病毒载体和包装载体转染293T细胞完成慢病毒包装，收集含慢病毒的细胞培养液，用其培养间充质干细胞，使慢病毒侵染间充质干细胞，再利用嘌呤霉素筛选并稀释筛选单克隆细胞，最终得到响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞。本发明制备的间充质干细胞，其能够模拟人和动物体内血糖变化表达胰岛素，为糖尿病的治疗提供了新的手段。

本发明授权一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法在权利要求书中公布了：1.一种响应葡萄糖变化表达胰岛素的间充质干细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、克隆并筛选可以响应葡萄糖变化调节基因表达的启动子； S1.1、响应葡萄糖浓度调节基因表达启动子的确定； S1.2、引物设计与PCR扩增启动子； S1.3、启动子驱动的报告基因克隆； S1.4、筛选响应葡萄糖调节报告基因表达的启动子； S2、制备响应葡萄糖变化分泌鼠和人胰岛素的骨髓间充质干细胞： S2.1、构建响应葡萄糖变化表达人胰岛素hInsulin或小鼠胰岛素mInsulin融合基因的慢病毒载体； S2.2、转染、筛选和制备响应葡萄糖变化分泌鼠胰岛素的骨髓间充质干细胞； S2.3、转染、筛选和制备分泌人胰岛素的骨髓间充质干细胞； 所述步骤S1.1中响应葡萄糖浓度调节基因表达启动子的确定，具体步骤为：通过查阅文献资料，发现丙酮酸激酶PKLR，脂肪酸合成酶FASN，乙酰辅酶A羧基化酶alphaACACA以及碳水化合物应答元件结合蛋白MLXIPL基因的表达受葡萄糖浓度或碳水化合物代谢影响；随后从真核生物启动子数据库下载这些基因的启动子序列； 所述步骤S1.2中引物设计与PCR扩增启动子的具体步骤为：设计并借助生物公司合成引物用于聚合酶链式反应PCR扩增上述四种基因的启动子；同时，培养HEK293T细胞并用于基因组DNA的提取；其中PCR反应体系包括：50ng基因组DNA，25μM的PCR扩增正向和反向引物各1.0μL，PhanataMaxPCR2反应混合物25μL，加水定容至50μL；PCR反应条件为：95℃变性5min；然后95℃变性1min，55℃退火20sec，72℃延伸1min，共35个循环；最后72℃延伸10min；其中，PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳鉴定； 所述步骤S1.3中启动子驱动的报告基因克隆的具体步骤为：将PKLR、FASN、ACACA和MLXIPL启动子载入报告基因表达载体pGL3-Basic上用于驱动下游荧光素酶基因的表达； 所述步骤S1.4中筛选响应葡萄糖调节报告基因表达的启动子的具体步骤为：首先确定维持HeLa细胞正常生长最低葡萄糖浓度为0.3mgmL，该浓度葡糖糖足以维持HeLa细胞正常生长；然后，将分别由上述启动子驱动的报告基因表达载体转染培养在不同糖浓度的HeLa细胞中，同时，利用不响应葡萄糖浓度调节基因表达的启动子AdML做阴性对照，48小时后收集细胞，裂解细胞，离心细胞裂解液，保留上清液并用于荧光素酶活性检测；随后对检测数据完成统计分析； 所述步骤S2.3中，筛选得到FASN和MLXIPL启动子，能够驱动小鼠或人胰岛素表达。

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