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龙图腾网获悉浙江大学申请的专利连续溶剂提取-固相萃取-液相色谱串联质谱检测土壤中抗生素生物有效性的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118604199B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-02发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410891784.5，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权连续溶剂提取-固相萃取-液相色谱串联质谱检测土壤中抗生素生物有效性的方法是由王玮;高汉勇设计研发完成，并于2024-07-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本连续溶剂提取-固相萃取-液相色谱串联质谱检测土壤中抗生素生物有效性的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种连续溶剂提取‑固相萃取‑液相色谱串联质谱检测土壤中抗生素生物有效性的方法，该方法首先使用连续溶剂提取法分别提取土壤中抗生素生物有效组分和抗生素可提取组分，然后使用固相萃取柱进行样品净化，最后使用液相色谱串联质谱的多反应监测模式测定金霉素、强力霉素、土霉素、四环素、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、阿奇霉素、红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、甲氧苄啶和林可霉素等多种不同类别的抗生素浓度。本发明将连续溶剂提取法与固相萃取相结合，配合液相色谱串联质谱检测，实现了复杂基质条件下痕量抗生素生物有效性的准确评价。

本发明授权连续溶剂提取-固相萃取-液相色谱串联质谱检测土壤中抗生素生物有效性的方法在权利要求书中公布了：1.一种连续溶剂提取-固相萃取-液相色谱串联质谱检测土壤中抗生素生物有效性的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1采集土壤样品后，放置于-20℃冰箱冻存； 2通过实验室自然通风晾干土壤样品得到待测土壤样本，再用玛瑙研钵进行充分研磨，使用200目筛过滤； 3称取1.9-2.1克步骤2中获得的过滤后的待测土壤样本置入离心管中，添加3mL0.01M氯化钙提取液后在混匀器上提取4小时，接着在3000×g离心5分钟，移取上清液并补充3mL0.01M氯化钙提取液继续进行4小时的提取，再次在3000×g离心5分钟，再重复一次后合并提取液即为抗生素生物有效组分； 4在步骤3剩余的土壤样本中添加5mL混合提取液超声提取15分钟，然后在8000×g离心5分钟，移出上清液并补充新鲜的混合提取液，再进行两次超声提取循环，合并提取液即为抗生素可提取组分，利用超纯水稀释以确保溶液中的有机溶剂含量小于等于5%；所述步骤4中，所述混合提取液由乙腈-乙二胺四乙酸-柠檬酸磷酸盐缓冲液和MgNO32-NH3•H2O按照体积比为3:1混合形成； 5分别采用6mL甲醇、12mL超纯水活化固相萃取所需的HLB小柱，抗生素生物有效组分直接通过HLB小柱进行富集，抗生素可提取组分则以3mLmin的流速通过HLB小柱进行富集，再采用10mL超纯水清洗，在真空条件下抽干HLB小柱直至底部变白； 6在标准大气压下采用12mL含0.1%甲酸的甲醇洗脱截留在HLB小柱上的目标物质，获得目标物质的待测样品； 7将步骤6获得的目标物质的待测样品通过真空离心浓缩仪浓缩至0.05mL，再加入1mL的乙腈和水，采用涡旋混合，最终获得溶剂体系为乙腈水的含目标物质的混合溶液，用于液相色谱串联质谱检测；其中乙腈水的体积比为9010； 8采用含0.1%的甲酸水溶液和纯乙腈溶液作为液相色谱串联质谱的流动相，梯度洗脱16分钟，通过多重反应监测方法分离并定量多类抗生素的浓度以测定土壤中金霉素、强力霉素、土霉素、四环素、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、阿奇霉素、红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、甲氧苄啶和林可霉素的生物有效组分和可提取组分浓度。

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