承德医学院王彬彬获国家专利权
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龙图腾网获悉承德医学院申请的专利一种桑树种质资源耐盐性评价及耐盐种质的筛选方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119605548B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411803934.9,技术领域涉及:A01G17/00;该发明授权一种桑树种质资源耐盐性评价及耐盐种质的筛选方法是由王彬彬;王晖;高妍夏;黄露;王敬设计研发完成,并于2024-12-10向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种桑树种质资源耐盐性评价及耐盐种质的筛选方法在说明书摘要公布了:本发明公开一种桑树种质资源耐盐性评价及耐盐种质的筛选方法,属于种质资源评价与筛选技术领域。本发明一种桑树种质资源耐盐性评价及耐盐种质的筛选方法,包括试验材料采样与贮藏、外植体准备、消毒、培养、耐盐鉴定、采用隶属函数和聚类分析进行耐盐性评价以及桑树冬芽耐盐性综合分析。本发明对收集于不同地区的桑树种植资源进行耐盐性鉴定,以桑树冬芽芽萌发状态指数以及相对强芽生长量作为筛选桑树大量材料耐盐性鉴定的评价指标,采用隶属函数和聚类分析的方法进行耐盐性综合评价,筛选出不同耐盐种质,为后续耐盐基因发掘和耐盐品种选育等提供优异的种质资源。
本发明授权一种桑树种质资源耐盐性评价及耐盐种质的筛选方法在权利要求书中公布了:1.一种桑树种质资源耐盐性评价方法,其特征在于,包括以下步骤: 1试验材料采样与贮藏:桑树度过深休眠期后至树液流动前均为采样适期,为保证不同种质材料冬芽发育状况的一致性,切忌在冬芽萌动后采样,剪取各地区木质充实、冬芽饱满、无枯梢、无病虫害的一年生健壮枝条,剪掉枝条下部约13,弃用,其余部分截成25-30cm的枝段,装入自封袋中,0-2℃保存备用; 2外植体准备:倒持枝段用手术刀沿叶痕上缘削掉叶痕,深达木质部;削掉枝段上的所有叶痕后,正持枝段用手术刀切除副芽和芽体下部鳞片,再用镊子轻轻剥掉外层鳞片,露出第一层幼叶,完整切下芽体,放入洁净培养皿中,盖好培养皿盖,2小时内进行消毒; 3消毒:将不同冬芽材料分别装入铜丝网制小提篮中,放入无菌水中浸泡10min,提出提篮,控干水分,转入70%乙醇中消毒20s,无菌水冲洗2-3次,再转入0.1%升汞液中消毒6min,无菌水冲洗4次,然后将提篮放在灭菌纱布上,待提篮及提篮中冬芽材料无水滴残留后即可接种; 4启动培养:将不同冬芽材料分别接种于预培养培养基中,每份材料接种45-50个外植体,每一培养瓶接种数不超过6个外植体,培养7d; 5耐盐鉴定:将供试材料冬芽分别放置于150mmolLNaCl和蒸馏水的12MS固体培养基上,将其置于温度25±2℃,光照2000~3000lx,昼夜光照周期14h10h的条件下的培养箱中,每瓶放置5个冬芽,每3瓶作为1个处理,3次重复;培养至14d统计冬芽外植体中死亡、萎缩、保持、脱苞、已开叶的个数,从而计算萌发状态指数;挑选其中强壮的芽分别放入新的150mmolLNaCl和蒸馏水的12MS灭菌固体培养基中,再培养14d后测定冬芽外植体的鲜重,计算相对强芽生长量;测定不同盐胁迫浓度下6个种质材料的第一次转接后第14天的萌发状态指数,第二次转接第14天的相对强芽生长量; 6采用隶属函数和聚类分析进行耐盐性评价:对步骤5中萌发状态指数和相对强芽生长量的隶属函数值进行计算,得到两个指标的隶属函数值,再将两个指标的隶属函数值进行平均计算,得到隶属函数平均值,根据隶属函数值大小对耐盐性进行分级;同时根据平均隶属函数值的大小,进行聚类分析; 7桑树冬芽耐盐性综合分析; 所述步骤5中萌发状态指数公式为:萌发状态指数%=脱苞数*1+已开叶数*2-死亡数*2-萎缩数*1总芽数*100%;所述相对强芽生长量公式为:相对强芽生长量%=耐盐处理第二次转接培养14d后鲜重对照第二次转接培养14d后鲜重*100%; 所述步骤6中萌发状态指数和相对强芽生长量的隶属值公式为: 耐盐系数=处理条件下的测量值对照条件下的测量值1 隶属函数 反隶属函数 式中,Uij第i个种质材料第j个指标的隶属函数值,Xij为第i个种质材料第j指标的耐盐系数,Xmin、Xmax分别为所有参试种质材料中第j个指标耐盐系数的最小值和最大值;计算萌发状态指数和相对强芽生长量两个指标的隶属值,若测定指标与耐盐性呈正相关,使用隶属函数公式2计算,若为负相关,则用反隶属函数公式3计算; 所述步骤6中耐盐性分级标准如下:当平均隶属函数值为0.9651~0.9844时,为特耐盐种植材料;当平均隶属函数值为0.7619~0.8274时,为强耐盐种质材料;当平均隶属函数值为0.488~0.7508时,为中度耐盐种质材料;当平均隶属函数值为0.1037~0.446时,为盐敏感种质材料;当平均隶属函数值为0.0000~0.217时,为盐高敏感种质材料。
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