上海益诺思生物技术股份有限公司施婧获国家专利权
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龙图腾网获悉上海益诺思生物技术股份有限公司申请的专利一种PCR偏好性的校正方法及免疫组库的定量分析方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119673282B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411741719.0,技术领域涉及:G16B30/00;该发明授权一种PCR偏好性的校正方法及免疫组库的定量分析方法是由施婧;叶程晨;周梦迪;陈厶文;赖友泉设计研发完成,并于2024-11-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种PCR偏好性的校正方法及免疫组库的定量分析方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种PCR偏好性的校正方法、一种TCR‑β免疫组库的DNA人工合成序列组合、一组用于扩增TCR‑β免疫组库的引物组合、一种gDNA样本的TCR‑β免疫组库定量分析方法、一种检测试剂盒及其应用,所述一种PCR偏好性的校正方法可以对PCR扩增过程中产生的偏好性进行有效校正,所述DNA人工合成序列组合可以有效地调整多重PCR引物组合的引物浓度比例,所述引物组合可以高效、定量且尽可能不互相干扰地扩增TCR‑β免疫组库,所述方法可以在DNA水平较为准确地定量分析免疫组库。
本发明授权一种PCR偏好性的校正方法及免疫组库的定量分析方法在权利要求书中公布了:1.一种免疫组库PCR偏好性的校正方法,其特征在于,所述校正方法包含以下步骤:1分析包含细胞基因组DNA的未知样本中每个独特的CDR3的序列数目并记为Ni,k,所述独特的CDR3记为CDR3i;2获取每个CDR3i对应的V基因和J基因;3根据每种V-J组合的基线偏好性校正系数bk对每个CDR3i的序列数目进行校正,校正按照如下公式进行: i、k、c均为大于等于1的整数,i代表对应的CDR3i,CorrectionNi,k表示该CDR3i经校正后的序列数目,k表示该CDR3i所对应的V-J组合k,bk表示V-J组合k所对应的基线偏好性校正系数,c表示多重PCR的循环轮数,bkc-1表示多重PCR循环c轮时V-J组合k所对应的偏好性校正系数; 所述bk通过如下步骤获得:1对所有M份训练样本提取DNA并分别进行clow轮低循环数的第一次多重PCR扩增;2将clow轮多重PCR扩增后所有产物分为两份,其中一份产物记为低循环样本,对所述低循环样本的多重PCR扩增产物进行二代测序建库,建库后浓度记为Conlow;另一份产物继续进行多重PCR扩增,记为高循环样本,高循环样本前后两次扩增的总循环数记为chigh,对所述高循环样本的多重PCR扩增产物进行二代测序建库,建库后浓度记为Conhigh;3对高、低循环样本进行测序,每份样本至少获得600万条序列;4对各高循环样本和低循环样本测序结果分别进行抽样,使抽样得到的数据量比例与ConhighConlow一致;5对测序结果进行生物信息分析并获得两份扩增产物的Ni,k;6按照如下公式获得每种V-J组合k的基线偏好性校正系数bk: m为大于1小于M的整数,表示M份训练样本中的一份,bm,k表示样本m中V-J组合k的偏好性校正系数,bm,k由如下公式获得: Bm,k为chigh-clow轮循环的总偏好性数值,通过如下公式获得: 表示样本m中对应V-J组合k的所有CDR3i在低循环样本中的序列数目,表示样本m中对应V-J组合k的所有CDR3i在高循环样本中的序列数目,Bm,k通过对向量和进行截距为零的线性拟合获得,Bm,k为样本m中V-J组合k的拟合函数的相关系数。
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