华南师范大学王萌萌获国家专利权
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龙图腾网获悉华南师范大学申请的专利一种提取土壤中痕量DNA的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119932158B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510149033.0,技术领域涉及:C12N15/10;该发明授权一种提取土壤中痕量DNA的方法是由王萌萌;梁演仪;何铭雨;王骁楠;李奇洳;曹百川设计研发完成,并于2025-02-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种提取土壤中痕量DNA的方法在说明书摘要公布了:本申请涉及生物技术领域,具体公开了一种提取土壤中痕量DNA的方法,本申请利用提取缓冲液和蛋白酶K对土壤样品进行温和孵育裂解,将土壤样品中吸附在土壤上的DNA和细胞内的DNA释放到提取液中;通过苯酚‑氯仿‑异戊醇核酸抽提液进行蛋白除杂,再利用超滤离心管进行离心、过滤洗脱获得含目标DNA的提取液,利用本申请的方法能够高效提取到土壤中痕量的环境DNA或宏DNA,尤其适用于生物存活较为困难的极端环境中DNA的提取,为极端生境中基于DNA的生物研究提供技术支持。
本发明授权一种提取土壤中痕量DNA的方法在权利要求书中公布了:1.一种提取土壤中痕量DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、将土壤样品、提取缓冲液和蛋白酶K混合,裂解孵育过夜,获得初步裂解液; S2、将步骤S1获得的初步裂解液进行第一次离心,取上清液加入苯酚-氯仿-异戊醇核酸抽提液进行蛋白除杂,进行第二次离心,取上清液,通过超滤离心管过滤洗脱,获得DNA提取液; S3、对步骤S2获得的DNA提取液进行DNA质量检测和定量,再进行后续分析或者保存所得土壤DNA; 所述步骤S1中,提取缓冲液由磷酸钠缓冲液、细胞裂解液和聚乙烯吡咯烷酮组成; 所述磷酸钠缓冲液由以下浓度的组分组成: 0.1M磷酸氢二钠十二水合物和0.1M磷酸二氢钠二水合物,磷酸钠缓冲液的pH为7.8~8.2; 所述细胞裂解液由以下浓度的组分组成: 0.5M三羟甲基氨基甲烷、150mM氯化钠、4%wv十二烷基硫酸钠; 所述土壤样品和磷酸钠缓冲液混合比例为1g:1ml,所述聚乙烯吡咯烷酮和土壤样品的质量比为0.0257~0.0515g:1g; 所述细胞裂解液和土壤样品的质量比为25~50μl:1g; 所述蛋白酶K和土壤样品的质量比为46~48μg:1g; 所述步骤S2中,过滤洗脱包括以下步骤: 取上清液,利用10kDa的超滤离心管过滤上清液,获得含DNA的目标截留物,再利用洗脱液洗脱含DNA的目标截留物后再次离心式过滤,获得DNA提取液; 所述洗脱液为pH=8.5的10mMTris-HCl缓冲液。
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