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龙图腾网获悉江洪申请的专利引物5’端反向互补的荧光PCR获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN108796047B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201810544265.6，技术领域涉及：C12Q1/6848；该发明授权引物5’端反向互补的荧光PCR是由江洪;江和来设计研发完成，并于2018-05-31向国家知识产权局提交的专利申请。

本引物5’端反向互补的荧光PCR在说明书摘要公布了：引物5'端反向互补的荧光PCR，属于分子生物学‑核酸扩增技术领域，其特征是一对引物5'端添加一段序列反向互补的荧光PCR扩增，带来扩增产物间末端互补，靶产物3'末端也可以互为模板、互为引物而增加扩增效率，在常规PCR指数放大109‑12基础上再增加灵敏度50倍，或同样灵敏度情况下可少扩增5个循环；另一面引物5'端互补不会延伸反而抑制原引物对3'末端间的聚合非特异性或少扩增5个循环可避开引物非特异扩增区。联合中部同序与3'最末端倒数第1‑2个碱基A腺嘌呤结尾的引物+UDG酶解dU代替dT的扩增产物,和矿物油密闭使PCR反应循环内无引物二聚体PD产生及杜绝产物气雾胶交叉污染。

本发明授权引物5’端反向互补的荧光PCR在权利要求书中公布了：1.引物5'端反向互补的荧光PCR方法，其特征在于：包括如下步骤：在一对引物的5'端添加一段序列反向互补再进行荧光PCR扩增，使得扩增产物间末端互补；引物5'端互补不会延伸反而抑制原引物对3'末端间的非特异性聚合，并且引物3'最末端倒数第1-2个碱基为A腺嘌呤结尾及UDG酶解dU代替dT的扩增产物，具体操作方式如下： 1在一对引物的5'端分别加上一段短于引物本身长度2-5b的反向互补人工序列，所述互补人工序列的长度为5-10b，根据扩增产物链3'末端与引物互补并且为下一轮循环反应模板的现象，一对5'互补引物扩增产物链3'末端间相应地也互相互补； 或2利用引物5'自身的序列作为人工互补序列，将一条引物5'端序列对应的5-8b反向互补序列按5'-3'方向加到另一条引物5'端前面，反之，另一条引物5'端的反向互补序列加一段至对应引物5'前面，形成两段连续5'反向互补序列而增敏，原引物与添加序列共用了一段引物5'自身序列，原引物序列与添加的序列间可插入一短4b序列限制酶切位点，使增敏PCR产物酶切后长度一致； 所述的PCR方法操作步骤如下： 1每个PCR反应管中先加入2μL含蔗糖的缓释引物或含蔗糖的缓释引物及染料于管底； 2混合其余PCR反应试剂，并吸取反应混合液18或13μL于PCR反应管管壁中部； 3沿PCR反应管管壁上部加入30μL矿物油封闭液面，高速离心，置于37℃20-40分钟； 4加5或10μL提取样本的DNA溶液、定量标准品、阴性对照品或阳性对照品于矿物油层表面下，加样吸头采用过滤芯吸头，每一管换一吸头； 5避免混匀，以免破坏缓释层，盖紧PCR反应管管盖，高速离心，立即进行PCR反应，热变性混匀缓释层而启动PCR扩增30-40个循环； 所述引物中部6-8b同序A结尾引物的尾碱基A前或后紧邻碱基变一个RNA。

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