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龙图腾网获悉杭州倍沃医学科技有限公司申请的专利一种可扩增环状DNA的混合酶体系及其应用和产品获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120866268B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511401011.5，技术领域涉及：C12N9/12；该发明授权一种可扩增环状DNA的混合酶体系及其应用和产品是由陈勇龙;王荆祎;丁新辉;王菲菲;陈波容;胡正义;李峰设计研发完成，并于2025-09-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种可扩增环状DNA的混合酶体系及其应用和产品在说明书摘要公布了：本发明属于DNA扩增技术领域，具有一种可扩增环状DNA的混合酶体系及其应用和产品。本发明提供了一种可扩增环状DNA的混合酶体系，所述的混合酶体系包括：聚合酶IIIτ夹子装载器和催化核心复合物。本发明提供的混合酶体系在效率、成本、安全性、适用性及灵敏度等方面均显著优于传统方法，为环状DNA的高效制备提供了全新的解决方案，在生物技术领域具有广泛的应用前景。

本发明授权一种可扩增环状DNA的混合酶体系及其应用和产品在权利要求书中公布了：1.一种可扩增环状DNA的混合酶体系，其特征在于，包括：聚合酶IIIτ夹子装载器和催化核心复合物，其制备方法包括如下步骤： S1、使用重悬Buffer，重悬菌株1菌泥，加入稀释Buffer稀释重悬菌液，破碎后取上清；上清加入硫酸铵进行沉淀，离心收集沉淀，沉淀溶解，得到τ夹子装载器初纯产物；所述的菌株1为表达dnaX、holC、holD、holA、holB的菌株；所述的硫酸铵在上清中的终浓度为0.20gmL；所述的重悬Buffer为8%-12%wv蔗糖、0.8-1.2mMPMSF、0.4-0.6mMDTT和1片50mL不含EDTA的cOmplete™蛋白酶抑制剂混合物的缓冲液；所述的稀释Buffer为含有8%-12%wv蔗糖、0.05-0.15MNaCl、10-20mM亚精胺、0.8-1.2mMEDTA的缓冲液； S2、使用核心重悬Buffer，重悬菌株3菌泥，破碎后取上清；上清加入硫酸铵进行沉淀，离心收集沉淀，沉淀溶解，得到催化核心初纯产物；所述的菌株3为表达dnaE、dnaQ和holE的菌株；所述的硫酸铵在上清中的终浓度为0.2-0.226gmL；所述的核心重悬Buffer为含有0.05-0.15MNaCl和8-12mM亚精胺的缓冲液； S3、以1：2-4的摩尔比将蛋白电泳后的τ夹子装载器初纯产物和蛋白电泳后的催化核心初纯产物混合，得到混合物； S4、混合物透析后洗脱，得到洗脱液，洗脱液中加入硫酸铵进行沉淀，离心收集沉淀，纯化，即得；所述的硫酸铵在洗脱液中的终浓度为0.4gmL； 所述的混合酶体系还包括：大肠杆菌聚合酶IIIβ夹子、大肠杆菌DnaA蛋白、大肠杆菌解旋酶、大肠杆菌起始复制因子IHF2、大肠杆菌单链结合蛋白、大肠杆菌GyrA2B2、大肠杆菌拓扑异构酶IV、大肠杆菌拓扑异构酶III、大肠杆菌RecQ蛋白、大肠杆菌引物酶、大肠杆菌终止位点结合蛋白、核糖核酸酶H、大肠杆菌DNA连接酶和大肠杆菌DNA聚合酶I； 所述的混合酶体系中聚合酶IIIτ夹子装载器和催化核心复合物、大肠杆菌聚合酶IIIβ夹子、大肠杆菌DnaA蛋白、大肠杆菌解旋酶、大肠杆菌起始复制因子IHF2、大肠杆菌单链结合蛋白、大肠杆菌GyrA2B2、大肠杆菌拓扑异构酶IV、大肠杆菌拓扑异构酶III、大肠杆菌RecQ蛋白、大肠杆菌引物酶、大肠杆菌终止位点结合蛋白、核糖核酸酶H、大肠杆菌DNA连接酶和大肠杆菌DNA聚合酶I的摩尔比为5：40：100：20：40：400：50：5：50：50：400：2：10：50：50。

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