吴青青获国家专利权
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龙图腾网获悉吴青青申请的专利一种多重可视化核酸检测体系的构建方法及检测条获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116640836B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310395790.7,技术领域涉及:C12Q1/6844;该发明授权一种多重可视化核酸检测体系的构建方法及检测条是由吴青青;陈星湘;卜朴;沈雪;黄月明设计研发完成,并于2023-04-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种多重可视化核酸检测体系的构建方法及检测条在说明书摘要公布了:一种多重可视化核酸检测体系的构建方法,包括以下步骤:S1,选取多个目标检测物的特异性保守基因序列;S2,根据S1中选取的多个目标检测物的特异性保守基因序列进行特异性LAMP引物的设计;S3,对S2中设计的特异性环引物进行标记并设计特异性同化探针;S4,将S2及S3中形成的引物、标记引物、同化探针及多种核酸模板置于同一体系进性LAMP扩增,形成含有多种标记物的扩增产物;S5,将S4中含有多种标记物的扩增产物置入到检测条的结合垫内;S6,在层析作用下扩增产物‑标记胶体金复合体通过检测带被对应抗体捕捉从而显色。本发明使用可视化LFD检测体系实现双显色,即UU和MH使用各自不同的显色系统,实现对UU、MH快速、简便的检测。
本发明授权一种多重可视化核酸检测体系的构建方法及检测条在权利要求书中公布了:1.一种同时检测UU和MH的LAMP引物在制备多重可视化核酸检测试剂中的应用,其特征在于,包括以下步骤: S1,选取多个目标检测物的特异性保守基因序列; 所述S1步骤中的目标检测物为解脲脲原体和人型支原体,并使用NCBIblast选取出UU、MH的特异性保守基因序列; 选取的UU保守序列为:cgaaattgtgatgaacgaaggtagagaagcaaaagtaatcagcattaaaaatactggtgaccgtcctatccaagttggatcacatttccacttatttgaaacaaatagtgcattagtattctttgatgaaaaaggaaacgaagacaaagaacgtaaagttgcttatggacgtcgtttcgatattccatcaggtactgctattcgttttgaaccaggagacaaaaaagaagtttcagttattggtttagtcggaacacgtgaagtttgaggtgtaaacggcttagttaacggaaaacttaaaaaataatctatttacaagtttctatatagacgaaggggaacattatgtttaaaatttcaagaaaaaattactcagatctatatggtatcacaactggtgatagcgttagattaggag; 选取的MH保守序列为:ctgttttaaggtgcaacatttctgtcattggtactggaactaacttcttaccaatttttgctaatatattgtggaattgtctaattccgtcacgattagttctttcggacataccaatgtagtatgtatctccaaccatcataacatctcccccgtcaacagttccgggagcttcaatttttgcaatgtgtccatcatcaaagtatttctttaatgcaggaagcatttcaactttttctccattacgtgttttagcacctggattagttaaaatagctagttcacctggaataataacagcagtatcttc; S2,根据S1中选取的多个目标检测物的特异性保守基因序列,使用引物设计软件PrimerExplorerV5进行特异性引物的设计; S3,对S2中设计的多个特异性环引物进行标记并设计对应的同化探针; S4,利用S2,S3中设计的引物、标记引物、同化探针及不同核酸模板进行LAMP扩增,形成多种含有标记物的LAMP扩增产物; S5,将S4中含有多种标记物的扩增产物置入到多重可视化核酸检测条的结合垫内,不同扩增产物在结合垫结合对应的标记胶体金颗粒; S6,在层析作用下扩增产物-标记胶体金复合体通过检测带被对应抗体捕捉从而显色; S2步骤中对目标检测物的特异性保守基因序列进行特异性引物的设计时使用在线引物设计软件PrimerExplorerV5针对UU和MH保守基因设计特异性引物,特异性引物具体包括外引物、内引物以及环引物,其中外引物包括F3和B3,内引物包括FIB和BIP,环引物包括LF和LB; S3步骤中探针类型为同化探针,同化探针包含两条反向互补的寡核苷酸链,一条使用荧光素基团标记作为荧光探针,另一条使用淬灭基团标记作为淬灭探针;在UU环引物LB5’端添加一段不同于UU基因的寡核苷酸序列,并使用荧光素基团TAMRA标记,获得UU荧光探针,设计与加入的寡核苷酸序列反向互补的特异序列,使用可淬灭TAMRA的淬灭基团BHQ2标记3’端,获得UU淬灭探针;在MH环引物LF5’端上添加另一段不同于MH基因的寡核苷酸序列,使用荧光素基团FAM标记,获得MH荧光探针,再设计与MH加入的寡核苷酸序列对应的反向互补序列,使用可淬灭FAM的淬灭基团BHQ1标记3’端,获得MH淬灭探针;UU环引物LF经Digoxin标记,MH环引物LB经Biotin标记;所述引物的序列如SEQIDNO.3-18所示。
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